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基因的PCR扩增技术实验中设置延伸反应的原因
如题所述
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推荐答案 2012-10-26
循环中的延伸步骤实际上是让taq聚合酶开始合成DNA,taq聚合酶是高温活性酶,在72度的时候合成DNA。如果是循环结束后的5~10分钟终延伸,它的作用实际上是起到一个补偿作用,有时候你循环过程中的延伸时间没有控制好,聚合酶并没有延伸完毕就开始下一个循环了,这样一个终延伸可以使未合成完的DNA补完。另外还有就是使末端加A充分。
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其他回答
第1个回答 2012-10-26
PCR过程中,碱基链的延伸配对是需要时间的,因为G/C、A/T配对时相互之间的键是不同的,再者扩增链有一定长度,不是转瞬就可以完成的
相似回答
pcr扩增反应中设置延伸的原因
答:
延伸
是给出合成
扩增
子的时间。扩增子较小时(一两百个碱基对),很快就能够合成完毕,延伸步骤不是很重要,但是如果扩增子较大(几千碱基对),则不给出足够延伸时间便无法合成完整的扩增子。合成/扩增速度是看DNA聚合酶的性质。通常建议的
设置
是眉一千bp给一分钟延伸时间。
做
PCR反应
为什么在循环结束后要有5min
延伸反应
?
答:
先95度,dna在高温下变性,解链成单链分子 然后退火,具体温度与所用引物有关
,就以55度为例吧。引物与单链dna模板结合上去 再72度延伸,在taq聚合酶的作用下,引物延伸。该循环结束。注意,此时尚有正处于合成过程中的dna链,为了保证充分的得率,所以再增加5分钟,以允许尚处于合成状态的dna分子能...
聚合酶链
反应中设置延伸的原因
答:
PCR是体外酶促合成特异DNA片段的新方法,
主要由高温变性、 低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成:即在高温(95℃)下
,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最适温度(...
PCR的反应
包括三个主要步骤
答:
1、模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后
,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;2、模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;3、延伸:DNA聚合酶...
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