硝酸纤维素的使用技巧是什么？

Question

如题所述

Answer 1

硝酸纤维素是一种白色的聚合物，这种物质其实有很多称呼，比如又被人们称为纤维素硝酸脂，其英文简称是nc，这种化学物质有很多特点，比如被阳光照射之后容易变色，还具有容易燃烧的特点，所以其实硝酸纤维素是一种危险品，平时使用的时候一定要谨慎，下面为大家介绍硝酸纤维素的正确使用方法。
硝酸纤维素膜的应用技巧：
1.蛋白与膜的结合原理
蛋白与膜的结合原理，已知的结合力包括疏水作用力H键静电作用力等，确切的结合原理并不明确，主要靠假说来支撑.主要有两种假说：
1)首先两者靠静电作阻力结合，然后靠H键和疏水作用来维持长时间结合.
2)首先两者靠疏水作用结合，然后靠静电作用来维持长时间结合.
两条假说，都表明其结合过程分为两步，首先结合和后面长时间结合.由于结合原理的不明确性，导致在这方面的工作非常依赖实践经验.
2.膜对结合的影响
1)膜孔径
有些技术人员倾向使用膜孔径来区分不同的膜，但是请注意这只仅仅限于同一厂家的产品，如果是不同厂家的产品，这种比较是无意义的.膜孔径与层析速度的关系，已在上文描述.
随着膜孔径减小，膜的实际可用表面积递增，膜结合蛋白的量也递增.估量表面积的参数为表面积比率(实际可用表面积与所用膜平面积的比率).
另外，膜孔径越小，层析速度也越小，那么金标复合物通过T线的时间也就越长，反应也就越充分.
综合以上两点，结论为膜孔径越小灵敏度越高.但是同时也减慢了跑板速度，增加了非特异性结合的机会，也就是假阳性越高.所以要按照试验结果挑选适合实际项目的膜，找到合适的平衡点.
2)不同厂家的膜差异
这个差异主要来源于两点：
1生产膜时，使用的聚合物和表面活性剂的来源，类型，数量不同.同理，在膜处理中这两类物质一般会对性能产生较大影响.
2处理过程不同.
3.生物原料，缓冲溶液的试剂和配方
1)生物原料，作为CT线的生物原料使用情况各异，所以这里只做略述.
首先，单克隆抗体与膜的结合优于多克隆抗体，主要时由于多克隆抗体有很多不同的表面位点，而各位点与膜的最佳结合条件都有细微的差别，毫无疑问就增加了优化难度.
其次，分子量越大，蛋白越难结合到固相材料上.
2)缓冲液
大家最关心的可能就是希望获得一个性能优良的配方，包括缓冲液，封闭液等等处理溶液配方.
其实也无法提供给一个万用配方清单.因为不同的反应体系需要不同的配方来支持，而不同机构的反应体系又有差异.想获”鱼”先学”渔”.为了不误导大家，在下面涉及到配方的问题上，仅提供思路，具体配方请自己摸索.
缓冲液的构成一般是：PBS(或其他缓冲体系)+作用物质(针对某一特定问题)+PH调整.在参考过以前的各种资料后，个人意见为配方原则为宜简不宜繁，根据自己的需要添加作用物质，原来的很多需要添加的作用物质，由于膜制造技术的改进已经不再需要.
推荐的缓冲体系为0.01MPBSPH7-7.2，该缓冲体系对多种抗原抗体都有良好的适应性.
作用物质的情况大致罗列如下：
少量NACL，减少信号强度，消假阳.
有机醇(甲醇，异丙醇等)，润湿膜，减少膜带有的静电，利于结合包被.个人不推荐，因制膜工艺改进.
表面活动剂(TW20，TX100)，增加亲水力，可避免线条中空现象，也可增色.
糖，保护剂，减缓老化速度，也可以增加亲水力同上.
调PH到某个位置，可以消假阳.
4.点样环境
环境湿度对点膜过程非常重要.最佳湿度一般在45-65%.
湿度过低，膜上容易聚集静电荷，点膜容易出现散点，导致测试会出现疏水斑.
湿度过高，膜上毛细作用加强，点膜容易引起CT线变宽甚至扩散.
为了保证点样时膜湿度的均一性，一般在点样前把膜放到该湿度条件下平衡一段时间.
5.点样仪器与膜面情况的关系
目前有两种点样方式，划膜式和非接触点膜式.非接触点膜式优于划膜式，进口划膜式优于国产划膜式.
因划膜式为软管将抗体划到膜表面，而膜本身的物理性质为软脆，划管会在其表面留下印痕.进口的划膜机由于使用的材料和控制系统较好，所以留下的划痕较轻，而国产仪器较差，留下的划痕也就比较严重.划痕容易对层析的金标复合物形成阻力，导致假阳性.同时容易出现跑板时在T线位置出现若有若无一条细线(鬼线)，而跑板结束后鬼线消失的奇怪现象.
6.膜的宽度与点样位置
膜的宽度一般有18mm(or20mm)和25mm两种，分别使用在做测试条和做测试板上.
然而，不同的T线点样位置将带来不同的灵敏度.点样位置上移，金标复合物通过T线位置时速度变慢，反应时间增加，灵敏度升高.反之灵敏度降低.这个方法可以用来改变灵敏度和消除假阳性。