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证明小分子和蛋白相互作用的方法能不能用pull down
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第1个回答 2017-06-07
GSTpull-down一般指用一个带GST标签的
重组蛋白
,与目的蛋白进行孵育,最后用结合GST的Beads拉下相互作用复合物。
免疫共沉淀
一般是用某一蛋白的抗体,在细胞裂解液中与相应的蛋白结果,用ProteinA/G将抗原抗体复合物拉下,最后在拉下的复合物中检测目的蛋白的实验。二者都是用于检测蛋白相互作用的实验。区别是pull-down一般是验证体外相互作用;免疫共沉淀一般用于检测细胞水平的体内相互作用。
第2个回答 2017-06-07
不一定是直接相互作用,也有可能是多个蛋白质分子形成了一个复合物,而这种情况用GST pull down是没法和蛋白直接相互作用区分的.
另外,GST pull down 是可以研究生理状态下的蛋白相互作用的.本回答被提问者采纳
第3个回答 2022-03-05
可以的呀,这通常叫做affinity pull-down。将小分子与resin固定在一起,样品(一般是细胞裂解液)淋洗,这样小分子就可以捕捉到与之结合的目标蛋白。
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pulldown
assay实验详细步骤?
答:
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如何检验靶点
蛋白与
化合物
能否
结合
答:
蛋白
水平几个assay先测一下,或者是再加上细胞水平,
用pulldown
实验,在
小分子
上面适当部位接上biotin,不影响活性的基础上,看看
能不能
把靶向蛋白拉到。或者有条件的可以用核磁共振来鉴定。
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蛋白
在Co-IP中的检测问题在实验中,
小分子
标签蛋白(如His-Tag、Flag-Tag)作为对照可能在Input组没有明显条带,这是正常现象。如图3所示,BAK1与PUB13的实验,小标签的缺失并不表示实验失...
干货!研究「
蛋白质相互作用
」
的方法
,都整理好了!
答:
Pull
-
down
实验(如GST Pull-
Down
)</:体外的亲和舞蹈,融合蛋白的巧妙设计,如同一场精心设计的筛选游戏,让
相互作用的蛋白
在舞台上留下独特的印记。接着,AP-MS(抗体亲和纯化-质谱)</登场,通过细致的步骤,包括裂解、孵育、清洗和检测,验证并筛选出那些紧密相连的蛋白伴侣。双
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