根据基因工程的有关知识，回答下列问题：（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有______

Question

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有______和______．（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如图所示．为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是______．（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即______DNA连接酶和______DNA连接酶．（4）反转录作用的模板是______，产物是______．若要在体外获得大量反转录产物，常采用______技术．（5）基因工程中除质粒外，______和______也可作为运载体．（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是______．

Answer 1

（1）经限制性核酸内切酶切割后能形成两种类型的末端，即平末端和黏性末端．
（2）为了便于相连，两种不同限制酶切割之后所产生的黏性末端必须相同．
（3）DNA连接酶分为两类：E．coliDNA连接酶和T₄DNA连接酶．这二者都能连接黏性末端，此外T₄DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低．
（4）反转录是以mRNA为模板逆转录先合成单链DNA，再合成双链DNA，利用PCR技术进行大量扩增．
（5）基因工程常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．
（6）当受体细胞是细菌时，为了增大导入的成功率，常用Ca²⁺处理，得到感受态细胞，此时细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒．未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱．
故答案为：
（1）黏性末端   平末端
（2）切割产生的DNA片段末端与EcoRI切割产生的相同
（3）大肠杆菌   T4
（4）mRNA（或RNA）  cDNA（或DNA）   PCR
（5）噬菌体   动植物病毒
（6）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱