wb实验全称叫什么?

Question

如题所述

Answer 1

免疫印迹实验（Western blotting，简称WB）是一种广泛应用于检测特定蛋白质的实验技术。在HIV病原学诊断中，WB是确认HIV抗原的标准实验方法，其结果常被视为其他检测方法准确性的金标准。
WB实验的具体步骤如下：
1. 样品制备：使用裂解缓冲液并进行超声处理。若使用RIPA裂解液，需加入蛋白酶抑制剂，比例为100:1。
2. 电泳：根据目标蛋白的大小选择适当的PAGE胶浓度，并建议上样量为20-30微克的总蛋白。
3. 转膜：可以选择湿转或半干转方法。对于大分子量的目标蛋白或低内源性蛋白水平的情况，湿转方法更为合适。
4. 洗膜：每次10分钟，共3次，使用TBST缓冲液进行洗涤。
5. 封闭：在含有5%脱脂奶粉的TBST中封闭1小时。
6. 洗膜：使用TBST缓冲液洗涤10分钟。
7. 抗体孵育：一抗应在含有5%BSA或5%脱脂奶粉的TBST缓冲液中稀释，并根据产品说明书选择合适的一抗稀释比例。使用脱脂奶粉的TBST缓冲液可降低背景噪音。一抗在4°C下孵育过夜效果更佳。
8. 洗膜：每次10分钟，共3次。
9. 二抗孵育：建议在含有5%脱脂奶粉的TBST中稀释二抗，参考生厂建议选择合适的二抗稀释比例。
10. 洗膜：每次10分钟，共3次。
11. 检测：使用化学发光法进行检测。