图位克隆法图位克隆法介绍

Question

如题所述

Answer 1

图位克隆(Map-based cloning)，也称定位克隆(positional cloning)，是一种于1986年由剑桥大学的Alan Coulson首次提出的基因克隆方法。这种方法的独特之处在于无需事先了解目标基因的DNA序列或其表达产物信息，而是依赖于特定的遗传技术和分子标记策略来实现基因定位和克隆。

首先，需要具备一个遗传分离群体，如F2、DH、BC或RI等，这个群体是基于目的基因的存在与否构建的。其次，图位克隆的核心步骤包括：

定位目标基因的紧密连锁分子标记，这是定位基因位置的关键。
通过遗传作图和物理作图技术，将目标基因定位到染色体的特定区域。
构建包含大插入片段的基因组文库，如BAC或YAC库，以便进行后续筛选。
利用与目标基因连锁的分子标记作为探针，从文库中筛选出可能含有目标基因的片段。
通过阳性克隆构建目的基因区域的跨叠群，以缩小搜索范围。
采用染色体步行、登陆或跳跃技术，逐步获得包含目标基因的大片段克隆。
进一步通过亚克隆技术，获得带有目标基因的小片段克隆，这有助于更精确地定位。
最后，通过遗传转化和功能互补验证，确认目标基因的确切碱基序列。整个过程如图4-10所示。

这些步骤相互配合，确保了在不知道基因序列的情况下，仍能有效地进行图位克隆，从而找到目标基因的精确位置。

扩展资料

图位克隆法(Map-based cloning)是新型分离和克隆植物基因的方法之一，在不知道基因的表达产物 ,在未知基因的功能信息又无适宜的相对表型用于表型克隆时，最常用的基因克隆技术就是图位克隆法。图位克隆是通过火析突变位点与已知分子标记的连锁关系来确定突变表型的遗传基本。图位克隆法随着相关配套技术（序列数据库、分子标记等）的日渐成熟，应用范围将越来越广。