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那为什么连接表达载体时没将T4连接酶混进那个载体附带的Mix液中呢?
为什么买的克隆载体附带的mix里有T4连接酶,而表达载体里没有T4连接酶而要额外买?
一管酶,三管buffer?
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推荐答案 2010-03-20
因为不同的实验会根据不同的插入片段选择不同的连接酶,除了T4之外还有其他的DNA连接酶。你需要查看说明书,看看哪种BUFFER可以让酶切效率达到最佳数值。当然如果是双酶切的话,你可能需要上网查找相应BUFFER了。
希望能够帮到你!来自:求助得到的回答
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其他回答
第1个回答 2010-03-19
厄。。。什牌子的啊。。。我用的都是分开的哦。。。BUFFER,酶等等。。。没有MIX的呢。
相似回答
T4
DNA
连接酶
DNA聚合酶 DNA连接酶 RNA聚合酶 区别和需要他们的场所
答:
T4
DNA连接酶用于平末端和黏性末端的连接 DNA连接酶 用于黏性末端的连接,这两种酶都是在基因工程构建基因
表达载体时
可能会用的酶。RNA聚合酶 是转录时用的酶,哪里有转录哪里就需要 DNA聚合酶 是DNA复制时用的酶,可把单个脱氧核苷酸连接成长链。而DNA
连接酶连接的
是DNA片段。
掌握这些技术,基因克隆不是梦
答:
另外,要说的是连接部分,传统的
连接酶
是
T4
用的比较多,T4可以连接黏性末端跟平末端,而golden gate里用的是T7,它的特点是只能实现连接黏性末端。因为T7的这一特性,所以在
连接的时候
可以把片段跟切好的载体混到一种特殊的buffer里,在这里内切酶跟T7都可以保持比较高的活性,通过温度的调节,实现克...
如何构建过
表达载体?
(分子生物学)
答:
第一种方式即将基因和可以
表达的
载体如PET,PGEX等酶切后直接连接,再转化入感受态细胞 第二种即将基因先和克隆载体如PMD连接,再将构建成功的克隆载体和PET等
表达载体
,酶切后连接,转化入感受态细胞,这种情况针对,直接PCR产物连不上的情况
DNA,纯化,
表达
,
连接
.
答:
因此,必须仔细调整连接反应中两个DNA 的浓度,以便使“正确”连接产物的数量达到最佳水平,此外还常常使用碱性磷酸酶去除5’磷酸基团以抑制载体DNA的自身环化。利用
T4
DNA
连接酶
进行目的DNA和
载体的
体外连接反应,也就是在双链DNA 5’磷酸和相邻的3’羟基之间形成新的共价键。如载体的两条链都带有5’磷酸(未脱磷),...
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