Cck8实验方法

Question

如题所述

Answer 1

关于Cck 8实验方法这个很多人还不知道，今天来为大家解答以上的问题，现在让我们一起来看看吧！
1、方法/步骤分步阅读1/5先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。
2、2/5按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。
3、3/5接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。
4、根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。
5、）4/5在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。
6、将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃,5% CO2），向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数），将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
7、5/5用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
8、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
9、24小时内测定，吸光度不会发生变化。
10、总结：1/1先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
11、2、按比例 ( 例如:1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度。
12、3、建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
13、注意事项如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基。
14、当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
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