大肠杆菌作为基因工程受体菌的特点:
1、发酵产品具有高浓度、高转化率和高产率。
2、菌株能利用常用的碳源,并可进行连续发酵。
3、菌株不是致病株,也不产内毒素。
4、代谢控制容易进行。
5、能进行适当的DNA重组,并且稳定。
扩展资料:
检验方法:
1、发酵法:
这种方法主要是在44.5℃下的培养基上进行大肠杆菌的培养,该培养基含有荧光底物,需要培养 24 h。
然后对荧光底物进行释放,需要采用葡萄糖醛酸进行,让培养基能够在紫外光的照射下发出荧光。采用这样的方式方法,还可以进行统计学估计原来样品中的菌落。
主要步骤包括发酵、分离培养、二次发酵、显微镜观察等。
2、滤膜法:
该方法主要过程:加入 10 mL 左右的无菌水于滤器中,然后掺入一些无菌水进行清洁滤器的内壁,再进行过滤,将滤膜放在 M-FC 培养基中,两者之间不能够有气泡,然后进行密封。
存放温度为 44.5℃,存放时间约 24 h,直到大肠杆菌的菌群变成蓝色或蓝绿色。然后记录数据,估算每一单位的水溶液菌群数量,然后进行大肠杆菌量值的换算。
3、平板计数法:
用无菌吸管吸取稀释度样品1 mL,该样品与乳糖胆盐发酵类似,然后将其放入无菌培养皿中,再加入温度于 45℃下的 CDLJ JD 显色培养基中10 mL的量,并进行培养皿中溶液均匀混合。
可以通过快速转动培养皿的方式,等溶液凝固以后,加入5 mL左右,然后快速摇晃培养基,使其可以均匀覆盖平板表面,等其凝固以后,翻转培养基,在温度37℃中培养24 h左右,然后观察其形态,颜色等变化。
除此之外,平行设置两个稀释度培养基,步骤是先稀释样本,通过稀释后,微生物可以分散为单个细胞,然后进行一定环境条件下培养,直到其长成菌落为止,然后进行计算大肠杆菌的数量,通过稀释度和样本数量进行计算。
4、免疫磁珠法:
该分离技术的主要原理是以磁珠为载体和抗体,进行抗体和磁珠的结合,然后通过磁力技术完成力学的移动,进而分离大肠杆菌。
与其他分离细菌的方式相比,这样的方式方法具有一定的优点,该技术可以提升样本中病原性弧菌的检测成功率,并且免疫磁珠技术可以于不同菌种中对不同的微生物进行处理,进而在很大程度上提高检测效率 。
5、自动化仪器检测法:
主要是运用免疫自动化分析仪,该技术产生并运用于1970年。
随着科技的发展和进步,自动化仪器检测技术应用非常广泛,并且操作起来非常方便,可以节约很多时间,其受干扰的程度较小,可以节省人力物力的投入,也可以提高检测的精确度。
在现阶段的发展过程中,自动酶的免疫检测体系的应用非常广泛。
6、ATP生物发光法:
在近些年的发展过程中,生物发光技术应用很广泛,是一种比较快速的检测微生物的技术。
在活性细胞中,ATP是其常见的能量代谢产,可以提供细胞生理活动过程中所需的能量。并且,该技术可以在生物体内可以在一定范围内保持一定的含量。
食品中的大肠杆菌检测技术可以采用荧光光度的方法,因为生物体发光的原因是有荧光素酶的作用,产生了发光的效果。
该物质来源于北美的萤火虫体内,可以催化荧光素的氧化作用,不过,该物质性质不稳定,可以对荧光进行快速分解。另外,该检测技术结果获得过程是非常快的,并且该设备携带方便,十分适用于现场检测。
参考资料来源:百度百科-基因工程菌
参考资料来源:百度百科-大肠杆菌
优点:
1、遗传背景清楚。目标基因表达水平高,表达系统成熟完善。
2、易于培养(培养方法简单、生长快、培养周期短、抗污染能力强)、成本低,被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物。
缺点:
1、表达产物缺少饭以后的修饰(如糖基化、烷基化、磷酸化、特异性的蛋白水解加工等);同时高表达时易折叠错误导致表达产物没有活性,而且大肠杆菌本身含有内毒素和有毒蛋白,可能混在产物里,应用受限。
2、真核生物的启动子不能被原核细胞(大肠杆菌)的RNA聚合酶识别。
3、真核生物的mRNA上没有SD序列,因此不能被原核细胞核糖体结合。
4、真核生物的基因含有内含子,原核细胞缺乏见他们的转录物进行拼接加工的机制。
5、真核细胞的基因产物,往往需要翻译后加工,真核细胞缺乏翻译后加工有关的酶。
6、真核生物基因表达的蛋白质易被原核细胞蛋白酶所降解。
扩展资料:
基因工程菌应具备以下条件:
1、发酵产品具有高浓度、高转化率和高产率;
2、菌株能利用常用的碳源,并可进行连续发酵;
3、菌株不是致病株,也不产内毒素;
4、代谢控制容易进行;
5、能进行适当的DNA重组,并且稳定。
参考资料来源:百度百科-大肠杆菌
参考资料来源:百度百科-基因工程
参考资料来源:百度百科-基因工程菌
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