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双酶切自连
双酶切
能够避免
自连
吗?
答:
不过切质粒后立刻跑胶,而不加
连接
酶,一般
自连
是很少见的。
“双酶切”
可以避免自连的说法也不完全错。因为和一个酶相比,可能性大大降低了。我说的上面的实验是把两个片段提出来后,让他们自连,而不是让质粒的2端自连。
载体
双酶切
并做了去磷酸化,为什么
自连
的还那么多
答:
有两个方面,一是载体本身
酶切
不充分,没有完全切开;二是去磷酸化不充分。
为什么
双酶切
可以防止基因的
自连
,为什么为什么!!!
答:
如用A酶和B
酶切
,则目的基因和载体为A——B,目的基因的A端可与载体的A端相连,B端可与载体B端连,自己就不能首尾相连了,因黏性末端不同。
用fermentas的Kpn1和bamH1做
双酶切
,用的buffer是Buffer bamH1,做了...
答:
质粒自连说明双
酶切
没有切开。不知道你的buffer是怎么选的,如果两种酶在buffer中的活性不同的话,活性较低的那个可以加大酶量,同时延长酶切时间,或者更换buffer。条件需要自己摸索。
双酶切
质粒后电泳 的问题
答:
很显然是质粒发生了
自连
啦。切开的2个质粒连起来了,因此相当于2个质粒的大小。你需采用磷酸化避免自连发生。
再次请教生物问题
答:
一般,防止酶切产物
自连
最常用的就是
双酶切
,因为产生的粘性末端不同,所以很难发生自连。但实际上最后筛选的时候经常也会出现空载体的情况,这个很大一部分原因是有部分载体没有切动,并不是载体自连的问题。这些没有切动的载体转化率是非常高的,这是转化过程中假阳性的最大来源。载体自连最容易...
基因工程使用
双酶切
和单酶切
答:
双酶切
之后,由于用的两种酶切出来的粘性末端序列不一样,所以一般载体不会再
自连
。而你说的载体和基因片段再重新连起来,也是不太可能的,因为连接反应是需要ATP提供能量的,酶切体系里面没有ATP,所以不会再连接。质粒切开后,一般是通过琼脂糖凝胶电泳的方法,把大小不同的两个片段分离开,然后把...
请大家帮我看看我的
双酶切连接
转化过程哪儿出错了
答:
pcr没有问题。而且
双酶切
一般不会出现片段
自连
的情况。所以那个条带不是目的片段的自连,而是超螺旋的质粒。要鉴定片段是否插入了载体,最好用双酶切进行鉴定。若是空载严重,应该是载体自连,或者酶切不充分。
在基因工程中,用
双酶切
目的基因和质粒时怎么保证目的基因和载体的定向连...
答:
同一种
酶切
的末端可以相
连接
在一起,如果质粒的左端和目的基因的左端用同一种酶切,二者的右端用另一种相同的酶切,那么就可以实现定向连接了。
为什么
双酶切
可以避免自身环化?
答:
酶有特异性,不同的没切后粘性末端不同。
双酶切
之后,由于用的两种酶切出来的粘性末端序列不一样,所以一般载体不会再
自连
。http://baike.baidu.com/link?url=FRJwp9TS7OdIFmR3MFvoTwtr-FgAHQ8RazP9a560Z_idgLhSHbjoC4Y2xVaxlxOS7ldqRhP8n6VqKcjFfVYoWq http://baike.baidu.com/link?url...
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