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双酶切体系
20ul
双酶切体系
和10ul双酶切体系的区别
答:
1、产物浓度不同 20ul
双酶切体系
比10ul双酶切体系产物的浓度高。2、DNA反应量不同 20ul双酶切体系所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多,进行双酶切时所要切的DNA量也不同。研究中常用的双酶切体系就是20ul双酶切体系和10ul双酶切体系,二者除了调配比例之外,所用的酶是相同的,所以反应温...
双酶切体系
一般怎么优化
答:
从试验中对
酶切
-连接时间的几个梯度处理2,3,4,6h结果来看,酶切-连接时间以4h为最佳,2h,3h的处理效果不理想,而6h 的处理和4h的效果没什么区别,酶切-连接充分的样品预扩增后,可见在溴酚兰指示带上、下均呈明亮的连续一片(smear),因此连接时间以4h为最佳,时间太短酶切-连接不充分,太长会延长试验周期。 3、...
两种酶的反应缓冲液不一样,做
双酶切
时如何处理?
答:
如果是分开
酶切
的话,第一个酶切完成后要回收(可用醇回收,效率比较高)后,再进行第二次酶切。做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来。
Xho1和Nde1 50μl
双酶切
反应
体系
的配制??
答:
由这两种酶组成的
双酶切体系
并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且加入5 μl的10×H Buffer(使得酶切体系中的Buffer...
在XhoⅠ和XbaⅠ限制性内切酶
双酶切体系
中,反应体系是什么?或者这两种酶...
答:
你可以在内切酶公司网站上查到推荐的反应
体系
:从图上看,这两个酶在不能再另一个酶的推荐buffer中使用,只能用2X Tango buffer进行
双酶切
,而从酶活性上来看,XbaI在2X Tango中,活性50-100%,而XhoI则是100%,所以如果两个酶要调整用量的话,XbaI需要是XhoI用量的2倍,但就是酶总量不能超过总...
双酶切
的问题
答:
如从11kb的载体上
双酶切
1kb的片段,那么载体片段和切下的片段质量比就是10比1,那么荧光强度也是10比1,如果你的原始酶切的质粒质量就不是很多,那么切下的片段就会根本看不到。解决这个问题的方法就是加大原始酶切反应
体系
中的质粒的浓度或者电泳时提高上样量。接着,还有一种可能就是两种酶的酶切...
基因工程使用
双酶切
和单酶切
答:
双酶切
之后,由于用的两种酶切出来的粘性末端序列不一样,所以一般载体不会再自连。而你说的载体和基因片段再重新连起来,也是不太可能的,因为连接反应是需要ATP提供能量的,
酶切体系
里面没有ATP,所以不会再连接。质粒切开后,一般是通过琼脂糖凝胶电泳的方法,把大小不同的两个片段分离开,然后把...
双酶切
的连接反应
答:
应用大
体系
,如100微升。纯化问题:纯化PCR产物割胶还是柱式,我推荐柱式,因为割胶手法不准,很容易割下大块的胶,影响纯化效率。现在的柱式纯化号称可以祛除引物,既然如此,酶切掉的几个碱基肯定也会被纯化掉了。所以,PCR产物和
双酶切
产物的纯化均可应用柱式纯化。我用的是TAKARA的纯化柱试剂盒酶量的...
Ecor1 和 Nco1
双酶切体系
的配制
答:
你用的是哪个公司的酶? 不同公司的buffer不一样的。不过,对于一般的体系,可以选择10微升体系或20微升体系。具体是1/10体积的buffer,酶的总体积控制在1/10以内,比如10微升
体系酶
量不要超过1微升,20微升体系不要超过2微升。DNA加入1~1.5微克即可。用水补足体积。
双酶切
后小片段更亮
答:
双酶切
后小片段更亮的原因是
酶切体系
中的质粒加的不够多,需要注意
双切
酶的活性或浓度、温度、离子等对酶活是否有影响。双酶CoQ10是一种化学物质,分子式是C59H90O?。双酶CoQ10是一个能量携带者,能加速冠状血液循环,促进冠状动脉供给心肌充足的氧气,提供心肌细胞足够能量,恢复心脏供血动力。
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