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Xho1和Nde1 50μl双酶切反应体系的配制??
用Xho1和Nde1对载体质粒和目的片段分别进行双酶切,50μl的酶切体系应该怎样配制?我不知道每种试剂加多少好?(PS:反应体系中要用到BSA)。
谢谢大家了~~
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推荐答案 2008-12-19
由这两种酶组成的双酶切体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且加入5 μl的10×H Buffer(使得酶切体系中的Buffer浓度为1×工作浓度),最后加入适量的质粒分子并双蒸水补足反应体积至50 μl。
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Xho1和Nde1
50μl双酶切
质粒加多少?
答:
你质粒浓度是多少啊?人家100~300的加2
μl
,你提的那么少……加20吧……多切切。
nde1和
not1
双酶切
效率高吗
答:
由这两种酶组成的
双酶切体系
并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。 如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于
50 μl的
酶切体系而言应分别加入1.5 μ
l的Xho1和Nde1
并且。
单
酶切
质粒,需要6000ng,应该加多少微升质粒
答:
由这两种酶组成的
双酶切体系
并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用HBuffer,对于
50μl的
酶切体系而言应分别加入1.5μ
l的Xho1和Nde1
并且。
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