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两种大小相同的蛋白纯化
蛋白质纯化
过程中为什么盐析后还要进行透析
答:
进一步纯化,一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳、等电聚焦等作为最后
的纯化
步骤。结晶是最后的一步分离纯化的方法:1.分子
大小
;2.溶解度;3.电荷;4.吸附性质;5.对配体分子的生物亲和力等。 (一)根据分子大小不同的纯化方法 1. 透析 利用
蛋白
...
蛋白质
分离纯化是否有一个可以通用
的纯化
方式组合?
答:
这个是不可以的。一种
蛋白质
在
大小
带电,性疏水性等各个方面的性质都是不
一样的
。而蛋白质的分离
纯化
就是依据这些性质的不同来进行。因此不能找到一个通用的纯化方法。只能得到一个通用的路线途径。比如说先进行细胞破碎,然后粗分离,粗提取,纯化。是一个比较经典的纯化步骤。
如何理解样品制备过程中
蛋白质
分离,提取和
纯化
?
答:
1、这个你有必要去了解下电泳的原理,事实上,胶体具有电泳现象,而蛋白能是一种生物大分子,能够配成胶体溶液。电泳时,通过一定手段(加热等)使
蛋白质
带上电荷,那样在电场中能够定向移动。而蛋白质所带电荷,蛋白质分子量的
大小
以及结构等会影响迁移的速率 2、双向电泳分离技术利用复杂蛋白混合物中...
我的目的
蛋白
酶
大小
为35kDa和32kDa,其他杂蛋白均大于45kDa,我应该怎么...
答:
若是有标签,那就直接上标签特异性的亲和了,如His-tag、GST-tag等;2,离子交换:若无标签,可考虑离子交换,这需要优化条件,而且估计需要2步离子交换;初步的
纯化
完成后,如果纯度还达不到你的要求,再根据残留的杂
蛋白
的分子量
大小
考虑分子筛分离(一般分子量差异在2倍以上才能高效分离)。欢迎继续...
如何评价
蛋白质的纯化
效果,如何评价蛋白质特定的纯化工艺
答:
蛋白质
的分离
纯化
方法 2.1根据分子
大小
不同进行分离纯化 蛋白质是一种大分子物质,并且不同蛋白质的分子大小不同,因此可以利用一些较简单的方法使
蛋白 质
和小分子物质分开,并使蛋白质混合物也得到分离。根据蛋白质分子大小不同进行分离的方法主要...
原核表达常见问题(三)
蛋白纯化
后续的问题分析
答:
1.目的
蛋白纯化
浓缩之后,目的蛋白条带周围出现杂带,据推测可能是插入目的基因后,外源基因的表达刺激大肠杆菌产生了宿主蛋白酶,对异源蛋白进行降解的产物。样品缓冲液有
相同的
pH 和离子强度。离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不一样达到分离目的的一种蛋白纯化...
前后两次
纯化
出
蛋白
的分子量略有差别是什么原因
答:
当在前后两次
纯化
过程中得到
的蛋白
分子量出现略有差别时,可能的原因有:1.蛋白降解:长时间或不适当的储存、处理条件可能导致蛋白部分降解,从而导致测得的分子量减小。2.实验条件:轻微的实验条件变化,例如pH、盐度、洗脱缓冲液的组成、温度等,都可能影响蛋白质的结构和随后的迁移行为,例如电泳缓冲液...
简述
蛋白质
分离
纯化
可依据哪些差异
答:
如阴离子交换层析,含负电量小
的蛋白
质首先被洗脱下来。b.分子筛,又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内,滞留时间长,大分子蛋白质不能同时入孔内而径直流出。5、超速离心:既可以用来分离
纯化蛋白
质也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质其密度与形态各不
相同
而分开。
...蛋白时常用
蛋白质
变性和复性方法来
纯化蛋 白质
,为什么
答:
引起
蛋白质
变性的因素很多,物理因素有高温、紫外线、X-射线、超声波、高压、剧烈的搅 拌、震荡等。化学因素有强酸、强碱、尿素、胍盐、去污剂、重金属盐(如 Hg2+、Ag+、Pb2+ 等)三氯乙酸,浓乙醇等。不同蛋白质对各种因素的敏感程度不同。蛋白质变性后许多性质都发生了改变,主要有以下几个方面...
蛋白质
分离方法有哪些,它们的特点各是什么
答:
1.根据分子
大小
不同进行分离
纯化蛋白质
是一种大分子物质,并且不同蛋白质的分子大小不同,因此可以利用一些较简单的方法使蛋白质和小分子物质分开,并使蛋白质混合物也得到分离.根据蛋白质分子大小不同进行分离的方法主要有透析、超滤、离心和凝胶过滤等.透析和超滤是分离蛋白质时常用的方法.透析是将待分离的混合物放入...
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