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琼脂糖凝胶电泳上样缓冲液
用
琼脂糖凝胶电泳
分离dna样品时,电泳
缓冲液
的ph值应该在什么范围之内...
答:
主要是看tris的缓冲范围,Tris
缓冲液
的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间,算是中性和偏碱性.DNA肯定是要带负电荷的,所以
电泳
的时候才会向正极跑.电泳槽一般都会标明正负极的,只要把电源和电泳槽的正负极对应就好了.
琼脂糖凝胶电泳
的电泳缓冲液与凝胶加
样缓冲液
分别有何作用(原理)呢...
答:
加
样缓冲液
中有buffer染料,给核酸染色,指示作用,
电泳
缓冲液与制胶缓冲液是一样的,是1*TAE或5*TBE。
做
琼脂糖电泳
时可不可以先加样在加
缓冲液
啊?
答:
可以的,我们实验室由于人多,习惯所谓的“干点”,即在外面点好样后放入加了
缓冲液
的槽中。这样做要注意几点,一是楼上说的加缓冲液或者放胶的时候要慢,防止样被冲出来;二是要尽量点快一点,防止样品在孔里扩散。
琼脂糖凝胶电泳
用巴比妥
缓冲液
,你做时是怎么配置的,直接买试剂还是缓冲...
答:
我没有使用过巴比妥
缓冲液
。我做
琼脂糖凝胶电泳
通常使用的是TAE或者TBE。这两种都是直接买10倍浓度溶液,用水稀释后使用。实验用溶液一概而论的话,技术上来说,买试剂自配和买配好的缓冲液无差别。实用中如果有卖缓冲液,买来直接用比较方便。一般也认为厂商大批量生产,质量控制较统一和稳定。买...
DNA限制酶切和
琼脂糖凝胶电泳
中常说的Marker是什么?还有Loading Dye 在...
答:
细胞裂解后的裂解
液
,加loading 100℃加热,也是为了中止酶促反应,防止提取的蛋白质降解。loading dye 是跑琼脂糖凝胶用来染DNA的染料,它是和loading buffer按一定的比例混合而成的.有的进口试剂buffer里已经加了loading dye的,就不用加了.试剂说明书都有说明的..
琼脂糖凝胶电泳
marker是用来做参考的,...
琼脂糖凝胶电泳
的原理及影响因素?
答:
缓冲液
pH值:缓冲液的pH值对凝胶电泳的分离效果有影响。一般使用含有缓冲剂的缓冲液来保持适当的pH值,以确保目标分子保持带电状态并稳定分离。运行时间:运行时间决定了分子在凝胶中迁移的距离,通常根据目标分子的大小和凝胶孔径来确定适当的运行时间。样品处理:样品的预处理也会影响
琼脂糖凝胶电泳
的结果...
琼脂糖凝胶电泳
的原理
答:
3、融化后的
琼脂
溶液摇晃混匀,倒入
电泳
槽中,等其凝固;4、室温下凝固30-40min左右,小心的拔出梳子,取出凝固好的
凝胶
放入电泳槽内,准备上样;5、在电泳槽中倒入电泳缓冲液(TAE);没过胶面1mm左右,去除胶孔内的气泡。6、上样,5ulDNA样品加入1ul
上样缓冲液
(loading buffer)和1ul的染料,...
DNA
琼脂糖凝胶电泳
为什么在加
缓冲液
后点样
答:
点完样再加
缓冲液
,样品会被冲出来,另外不加缓冲液就拔梳子,孔道容易变形,不规则,
如何做1%的
琼脂糖凝胶电泳
?
答:
形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的
琼脂糖凝胶
液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。3、室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中。添加1×TAE
电泳缓冲液
至没过胶板为止。
简述tbe在
琼脂糖凝胶电泳
中的作用
答:
电泳缓冲液
的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na离子,Na离子的浓度太低时电泳速度变慢;太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,加入浓度为1-2mmol/L,目的是螯合Mg离子等,防止电泳时...
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