转化苗的gfpwestern blot检测是融合蛋白大小吗

Question

如题所述

Answer 1

检测方法：
1、实验准备

Modulus单管型多功能检测仪

Blue荧光模块(P/N
9200-040)

微量适配器(P/N
9200-928)

纯化的rAcGFP1蛋白（Clontech，NO.632502）

200ul加样器与20ul加样器

TE
Buffer
(10
mM
Tris-HCl,
1
mM
EDTA,
pH
8.0)

1.5ml离心管
2、.仪器准备
2.1
关闭Modulus的电源，为Modulus插入BLUE荧光检测模块.
2.2
打开Modulus的电源，仪器预热1min
2.3
按照说明插入微量适配器
3.、制备标准曲线
3.1
对rAcGFP1进行系列稀释
3.2
在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀释后溶液。注意：避免在微量比色杯中出现气泡，负责会引起检测误差。.
3.3
将微量比色杯插入到微量适配器中，点"Measure
Fluorescence
Raw."检测
3.4
记录检测结果，对其他样品重复4.2-4.3的步骤
3.5
利用荧光值（FSU）与样品浓度做出标准曲线
4、
校准
4.1
使用Modulus检测未知样品前，你可以使用rAcGFP1稀释液来校准Modulus仪器
4.2
使用表1中的5个稀释液来校准Modulus。选择"ng/µL"作为测量单位，使用0
ng/µL
作为空白标准；为了尽可能准确，使用接近实际样品的稀释液做其他几个点的校准。
4.3
保存校准，可供以后调用
(可选).
4.4
使用"Measure
Fluorescence."开始检测未知样品。注意：在校准后就无需再做标准曲线。
4.5
样品浓度将直接在屏幕上显示.
简介：
绿色荧光蛋白(Green
fluorescent
protein，GFP)是一类存在于腔肠动物体内的生物发光蛋白。1962年Shimomura等首先从多管水母(Aequoria
victoria)中分离出一种分子量为20kD的称为Aequorin的蛋白。由于水母整体荧光及提取的蛋白质颗粒荧光都呈绿色，因此，人们将这种蛋白命名为绿色荧光蛋白。
GFP具有多种优点：易于检测，灵敏度高；荧光性质稳定，耐受性强；易于表达，无细胞毒性；可用于活细胞检测。因此，GFP可作为报告基因用于检测基因表达或调控，或作为融合标签来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用，或者靶向标记某些细胞器

Answer 2

western
blot中蛋白样品调节浓度有很多方法
先检测出各个蛋白样品的浓度，根据体积通过不同单位的loading
buffer将样品稀释成不同的体积，即可以保证各个蛋白样品浓度一致
或者在样品裂解的时候，用裂解液或者pbs去稀释蛋白样品，达到调节浓度的目的