如何理解DNA连接酶的作用特点

Question

如题所述

Answer 1

作用特点：①不能连接两条单链dna或环化dna，只能连接双链dna分子的单链缺口。②只能连接失去一个磷酸二酯键形成的单链断裂，不能连接缺失一个或多个氨基酸缺口③只作用于3端羟基和5端磷酸的链④连接反应需要atp
nad+和mg2+
利用价值：可对缺口dna，平末端dna，黏性末端dna进行连接。

Answer 2

Answer 3

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教科书的观点：
DNA连接酶
无特异性，其催化dna片段末端连接的情况分两种：(1)催化相同或互补的
黏性末端
连接;(2)催化同一种限制
酶切
割产生的
平末端
连接。两种情况下，末端的“拼接”都会形成“
回文序列
”。
然而，在基因工程的实际操作中，催化DNA片段末端连接的方法是非常灵活的。例如，当目的序列和载体上没有相同的
限制性内切酶
位点可供
利用时
，而用不同的限制性内切酶切割后的黏性末端不能互补结合，则可用适当的酶将DNA突出的末端削平或补齐成平末端，再用
T4DNA连接酶
连接，但平末端连接要比黏性末端连接的效率低得多。
由此可见，DNA连接酶可以催化两种不同
限制酶
切割产生的平末端连接，而两个平末端拼接后，并不是“回文序列”。结论：DNA连接酶催化两个末端连接形成的新序列并不都是“回文序列”。(注：回文序列双链
DNA分子
中一段
旋转对称
的
核苷酸序列
，即以
对称轴
为轴心旋转180°后呈
对称状态
，它是大多数限制性内切酶的识别位点。《
中国百科大辞典
》)
在构建
基因表达载体
时，最简单的重组方式就是在
目的基因
DNA的两端用两种不同的
限制性酶
进行酶切，产生两个不同的黏性末端。再用这两种限制酶对合适的载体进行酶切，也产生两个不同的
粘性末端
。酶切后的目的基因和载体，由于它们各自的两个末端不同，都不会发生自身
环化
。