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双酶切鉴定阳性克隆时,选择两种内切酶的依据是?
如题所述
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第1个回答 2021-10-22
:载体自身环化效率过高、琼脂平板上的抗生素失活或含量过低、载体 DNA 与插入片段 的分子比率过高
本回答被网友采纳
第2个回答 2022-02-25
说没缺鉴定阳性克隆时选择两种内切酶的一句是。防止有误期的可能性。
相似回答
基因克隆
答:
然后结合同裂酶、异裂酶、同尾酶、可变酶特性进行RE
选择,
并且同时要考虑所选限制性
内切酶
对修饰敏感性。另外,根据试剂使用中使用的酶的数量,我们将酶切反应可以分为单酶切、
双酶切
和分步酶切。 单酶切 :同一个体系进行一种酶切反应; 双酶切 :同一个体系进行
两种酶的
酶切反应(针对反应条件一致的限制性内切酶)...
...和ecori
酶切
位点的dna片段
克隆
到一个质粒中及鉴
答:
2、酶切位点选择:由于您的DNA片段中含有BamHI和EcoRI的酶切位点
,因此可以选用这两种限制性内切酶进行双酶切。这样可以在DNA片段两端产生不同的黏性末端,便于与载体的相应黏性末端连接。同时也要注意避免所选用的酶切位点出现在目的基因内部,以免破坏基因的完整性。3、克隆过程:首先使用BamHI和EcoRI...
毕氏酵母
答:
1.5.2 重组DNA的转化与初步鉴定 将重组质粒载体转化至DH5a大肠杆菌中,经氨苄西林和X�gal互补筛选阳性菌落,提取阳性菌落重组质粒DNA,Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ
双酶切鉴定
。1.5.3 测序 将
阳性克隆
送上海基因公司进行核苷酸序列测定。1.6 转化酵母细胞并筛选阳性转化子将10 μg用Bgl Ⅱ切开的pPIC9k/MSP1�19溶于10 μL...
酶切
位点怎么
选择?
答:
(1)一般目的基因用于
克隆
表达的情况下,酶切位点的选择要考虑到:目的基因片段内部不含有所选的酶切位点(不然
鉴定阳性
重组子
双酶切时
会将目的基因切断)(2)实验后继应用的所有载体(真核、原核、酵母、昆虫)都尽可能含有所选的酶切位点.并且要保证在载体上的插入方向正确(定向克隆)。(不然换...
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