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pcr引物长为什么延伸温度会升高?
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为什么
在
PCR反应
过程中,使用三个不同的
温度
变化
答:
第一个一般在94-95度左右,叫做变性,就是通过加热打开双链。第二个
温度
点叫做退火,根据
引物
的TM算出,一般比TM低5度,有利于引物的结合。第三个温度叫做
延伸
,一般采用72度。是引物结合后DNA聚合酶按照模板合成新的链。一分钟一千个碱基对。如此循环。现在很多
PCR
都采用2部法,由于采用了不同的DNA...
PCR
技术
引物
原则
答:
引物
长度与
延伸温度
基本呈正比,还影响
pcr的
特异性。延伸温度一般在酶活性温度附近,从而去调整引物长度。引物长度的上限并不很重要,主要与反应效率有关。由于熵的原因,引物越短,它退火结合到靶dna上形成供dna聚合酶结合的稳定双链模板的速率越大。一般,如果扩增有一定程度不均一性的序列,则需要28~3...
pcr
技术的三个阶段
答:
延伸
阶段:在
引物
的作用下,DNA聚合酶开始从引物的3'端向5'端延伸合成新的DNA链。这一步需要将反应体系升温至72℃,使DNA聚合酶活性最
高
。延伸的过程中,会不断地添加新的DNA链,从而使DNA的复制得以进行。除了以上三个基本阶段,
PCR
技术还有其他几个关键步骤,包括:
温度
控制:在变性、退火和延伸阶段...
多聚酶链式反应的反应原理
答:
基本原理及过程如下:
PCR
循环过程中有三种不同的事件发生:(1)高温变性(2)低温复性(3)中温
延伸
1. 高温变性 :加热使模板DNA在高温下(90-95℃ )变性,双链间的氢键断裂而形成两条单链。2. 低温复性:在体系
温度
降至55-60℃ ,模板DNA与
引物
按碱基配对原则互补结合,使引物与模板链3’端...
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