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双酶切反应体系配比
在XhoⅠ和XbaⅠ限制性内切酶
双酶切体系
中,
反应体系
是什么?或者这两种酶...
答:
反应体系应该指的是,
两种酶同时使用时,应该用的buffer系统,且每一种酶的用量,DNA的用量,以及保证酶量不超过总反应体积的1/10
,即20ul体系中,两个酶的总量不能超过2ul。你可以在内切酶公司网站上查到推荐的反应体系:从图上看,这两个酶在不能再另一个酶的推荐buffer中使用,只能用2X Tango ...
Xho1和Nde1 50μl
双酶切反应体系
的配制??
答:
由这两种酶组成的双酶切体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,
两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度
。如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且加入5 μl的10×H Buffer(使得酶切体系中的Buffer...
takara公司的EcoR1和Not1 50μl
双酶切反应体系
的配制?
答:
酶各加1.5 ul,底物加入在2ug,37℃,1*H Buffer+BSA,
酶切
12小时。
分步
双酶切
答:
我可以告诉你步骤:如果两种酶的buffer浓度相同可以同时加进去切,如果不相同,先用低浓度切,再用高浓度切
。我只说后一种:30/50ul体系中2ul第一种酶,3ul buffer,按照你pcr产物的亮度来配比,不足部分用水补充,反正达到30ul就可以了,切两个小时后,加第二种酶2ul,buffer5ul,用水补到50ul...
双酶切
的20μL
反应体系
和反应时间如何确定?最好是说明原理。所用的...
答:
5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查
双酶切
buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以。有个别酶需要55度。注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性。
反应体系
中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中。
...2*buffer,1*buffer是什么意思啊?
双酶切
时他们之间怎么换算?
答:
10*的就是十倍浓度的 比如说你要配50ul
体系
那就加5ul的10*buffer 其他同理
20ul
双酶切体系
和10ul双酶切体系的区别
答:
1、产物浓度不同 20ul
双酶切体系
比10ul双酶切体系产物的浓度高。2、DNA
反应
量不同 20ul双酶切体系所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多,进行双酶切时所要切的DNA量也不同。研究中常用的双酶切体系就是20ul双酶切体系和10ul双酶切体系,二者除了调配比例之外,所用的酶是相同的,所以反应...
Hind III 和Sal I
双酶切反应体系
答:
以20微升
体系
为例 方法一 Buffer Tango™ 4微升 HindIII 1 微升 SalI 1 微升 Incubate at 37°C 2-3小时 方法二 Buffer R 2 HindIII 0.6 SalI 2.4 Incubate at 37°C 2-3小时 注意:最好用第一种方法,效果更好 ...
双酶切
的问题
答:
如从11kb的载体上
双酶切
1kb的片段,那么载体片段和切下的片段质量比就是10比1,那么荧光强度也是10比1,如果你的原始酶切的质粒质量就不是很多,那么切下的片段就会根本看不到。解决这个问题的方法就是加大原始
酶切反应体系
中的质粒的浓度或者电泳时提高上样量。接着,还有一种可能就是两种酶的酶切...
平时实验没有做成功|我成功了做实验
答:
20. 不知道大家都是怎么做酶切的,我的体会是,酶切质粒时,两个酶分别单酶切比直接
双酶切
效果要好很多(管家哥提醒这个要视不同
体系
而定)。我有一次双酶切两次都没连出来,后来分步单酶切,连接效率几乎100%。 可以第一个酶切完后直接把体系热失活,(根据酶说明书上一般是65度20min)然后直接向里面补第二个酶...
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