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如何避免载体自连接
再次请教生物问题
答:
这两种情况下,
通常为了防止载体自连会对酶切后的载体使用碱性磷酸酶处理,将DNA 5‘端的-P基团置换成-OH
,这样会一定程度的防止载体自连。
...单酶切后
怎么
把目的基因连到已经酶切过的
载体
上
如何防止自连
...
答:
单酶切要想防止自连,
最好的办法是把载体酶切产物脱磷酸
。脱了磷酸的载体就无法自连,它只能和目的片段连接。如果不想脱磷,可以在连接反应体系中加大目的片段的数量,提高阳性克隆的比例,但这不能完全避免自连。不过最好的办法还是
做双酶切
。单酶切连接实在麻烦。
如何避免载体自连
现象
答:
碱性磷酸酶处理切开的载体
~可减少自连的产生~再一点双酶切要充分~可先做一个小切的预实验~
为什么碱性磷酸酶处理可以
防止
质粒
载体
DNA
自连
的作用
答:
碱性磷酸酶可以去除DNA断裂处的5'端的磷酸基团.5'端的磷酸基团对于DNA连接是必须的,
用碱性磷酸酶处理切开的载体后
,载体不能在DNA连接酶的作用下自连,而目的基因片段两端是有5'端的磷酸基团的,可以在DNA连接酶的作用下与载体连接.所以碱性磷酸酶处理可以防止质粒载体DNA自连的作用.
基因工程中
如何避免载体
的自我环化和目的基因的双向插入?
答:
双酶切。在基因两端分别用不同的内切酶来酶切,
载体
上也用这两种酶来酶切。这样自己的酶切位点只能识别自己的位点,就不会发生基因方向的错误了。而且载体的两个位点互相不识别,也不会
自连接
。
基因工程中
如何避免载体
的自我环化和目的基因的双向
答:
避免
自我环化可以考虑使用双酶切位点和加CIAP处理 目的基因避免双向接入的话通过设计双酶切位点就能完美
避开
如何
提高目的基因和
载体
的
连接
效率
答:
为了
防止
目的两端及
载体
的两端
连接
在一起,可以用两种限制酶切割目的基因两端,同时也用这两种限制酶切割载体,这样就能形成两种黏性末端,同时也能防止目的基因和载体的
自连
。磁共振(MRI)成像具有良好的软组织对比度、高分辨成像和多参数扫描能力,且可以通过特异性磁共振分子探针来检测细胞分子水平的变化...
如何
克服
载体
自身
连接
的问题?
答:
首先要确认你的酶切位点,如果双酶切且末端不同,自连概率很小,一般不用处理;如果末端回文相同或是单酶切,
一般会用碱性磷酸酶处理
,去除磷酸化。
载体
和目的基因分别经限制性酶切后,产生不同的3'突出粘性末端。设计实验...
答:
1.不同的粘性末端不能相连。所以,如果要相连,就要去除不同的粘性末端,进行平末端相连。粘末端变成平末端有两种方法:klenow酶的补平或者s1核酸酶的切平。为了减少载体自连,
可以用碱性磷酸酶处理载体
。最后将载体和目的基因链接,构建重组质粒。2.设计引物,自带酶切位点,扩增目的基因,直接改变目的...
...检外源DNA其优点可以
防止
质粒和含同的基因的外源DNA片段自身环化_百...
答:
每种限制性内切酶的酶切位点是不一样的,因此,不同的酶切位点不能连到一起,相同的才可以。用不同的切,到
连接
的时候,可以有效
防止载体自连
,只能让外源DNA片段和载体之间那相同的酶切位点相互连接。
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