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如何防止载体自连
为什么碱性磷酸酶处理可以
防止
质粒
载体
DNA
自连
的作用
答:
碱性磷酸酶可以去除DNA断裂处的5'端的磷酸基团。5'端的磷酸基团对于DNA连接是必须的,
用碱性磷酸酶处理切开的载体后
,载体不能在DNA连接酶的作用下自连,而目的基因片段两端是有5'端的磷酸基团的,可以在DNA连接酶的作用下与载体连接。所以碱性磷酸酶处理可以防止质粒载体DNA自连的作用。 本回答由提问者推荐 举报| ...
...单酶切后
怎么
把目的基因连到已经酶切过的
载体
上
如何防止自连
...
答:
单酶切要想防止自连,
最好的办法是把载体酶切产物脱磷酸
。脱了磷酸的载体就无法自连,它只能和目的片段连接。如果不想脱磷,可以在连接反应体系中加大目的片段的数量,提高阳性克隆的比例,但这不能完全避免自连。不过最好的办法还是
做双酶切
。单酶切连接实在麻烦。
再次请教生物问题
答:
这两种情况下,
通常为了防止载体自连会对酶切后的载体使用碱性磷酸酶处理,将DNA 5‘端的-P基团置换成-OH
,这样会一定程度的防止载体自连。
如何避免载体自连
现象
答:
碱性磷酸酶处理切开的载体
~可减少自连的产生~再一点双酶切要充分~可先做一个小切的预实验~
如何
提高目的基因和
载体
的连接效率
答:
为了防止目的两端及载体的两端连接在一起,
可以用两种限制酶切割目的基因两端,同时也用这两种限制酶切割载体,这样就能形成两种黏性末端
,同时也能防止目的基因和载体的自连。磁共振(MRI)成像具有良好的软组织对比度、高分辨成像和多参数扫描能力,且可以通过特异性磁共振分子探针来检测细胞分子水平的变化...
【求助/交流】平末端必须去磷酸化吗
答:
!!chenliang_0513(站内联系TA)肯定是没有必要的ben1147(站内联系TA)在载体两端都是平末端的时候,去磷酸化
防止载体自连
如果一端平,一端粘性末端的话就不用,因为不会自连 在载体两端都是平末端的时候,去磷酸化防止载体自连
为什么碱性磷酸酶处理可以
防止
质粒
载体
DNA
自连
的作用
答:
你需要了解2个事实,1是,正常核酸片段两端的组成是,3‘-OH,5’-p基,正因为5‘磷酸的存在,才能和另一个片段的3-OH发生缩合脱水反应,谓之自连。而碱性磷酸能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。这样就不会发生缩合反应,
防止自连
的发生。
在基因克隆中
如何防止载体
分子的自身环化作用
答:
这个要看你是具体如何克隆的 如果你使用的是酶切连接,选择不同黏末端的酶一般不会发生自身环化 如果是平端连接,则需要对载体去磷,
也就是碱性磷酸酶处理
。此时需要注意你的插入片段两边要有磷酸基团(可以引物合成时添加,也可设计平端的酶如EcoRV自己回来切),否则是连不上的。
都有哪几种方法
避免载体
质粒的自环化?
答:
具体可采用以下方法:(1)用
碱性磷酸酶处理
限制酶酶解产生的线性载体分子。碱性磷酸酶可除去线性载体DNA 分子的5¹-磷酸,而留下3¹-羟基基团。经过碱性磷酸酶处理的线性载体分子,除非插入外源DNA 片段,否则就不能重新环化为有功能的载体分子。(2)采用同聚物加尾连接技术,可自动防止线性...
如何
克服
载体
自身连接的问题?
答:
首先要确认你的酶切位点,如果双酶切且末端不同,自连概率很小,一般不用处理;如果末端回文相同或是单酶切,
一般会用碱性磷酸酶处理
,去除磷酸化。
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