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防止载体自连的酶
为什么碱性磷酸酶处理可以
防止
质粒
载体
DNA
自连的
作用
答:
碱性磷酸酶可以去除DNA断裂处的5'端的磷酸基团
。5'端的磷酸基团对于DNA连接是必须的,用碱性磷酸酶处理切开的载体后,载体不能在DNA连接酶的作用下自连,而目的基因片段两端是有5'端的磷酸基团的,可以在DNA连接酶的作用下与载体连接。所以碱性磷酸酶处理可以防止质粒载体DNA自连的作用。 本回答由提问者推荐 举报| ...
如何避免载体自连
现象
答:
碱性磷酸酶处理切开的载体
~可减少自连的产生~再一点双酶切要充分~可先做一个小切的预实验~
再次请教生物问题
答:
一般,
防止酶切产物自连最常用的就是双酶切
,因为产生的粘性末端不同,所以很难发生自连。但实际上最后筛选的时候经常也会出现空载体的情况,这个很大一部分原因是有部分载体没有切动,并不是载体自连的问题。这些没有切动的载体转化率是非常高的,这是转化过程中假阳性的最大来源。载体自连最容易发...
BAC
载体
为什么要脱磷?
答:
载体的去磷酸化:碱性磷酸酶处理
,避免载体自身连接。
为什么碱性磷酸酶处理可以
防止
质粒
载体
DNA
自连的
作用
答:
你需要了解2个事实,1是,正常核酸片段两端的组成是,3‘-OH,5’-p基,正因为5‘磷酸的存在,才能和另一个片段的3-OH发生缩合脱水反应,谓之自连。而碱性磷酸能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。这样就不会发生缩合反应,
防止自连的
发生。
为什么碱性磷酸酶处理可以
防止
质粒
载体
DNA
自连的
作用
答:
DNA连接需要自由的磷酸和羟基反映,去磷酸化后
载体的
末端都没有磷酸就不能连接了。而连接片段时,由片段上提供磷酸,所以还能连接
关于
碱性磷酸酶
CIAP的使用
答:
减压干燥就是用减压干燥器对微量生物样品进行干燥。常用的就是Eppendorf的concentrator系列减压干燥器。不减压靠室温干燥时间过长。你胶回收的时候你要的带的DNA量你可以估计一下,然后换算成摩尔数,加
载体的
时候也计算一下
载体
的量,二者5:1比例以上混合后连接。
为什么用两种不同的限制
酶
切目的基因和运
载体
,就能
防止
运载体本身、基...
答:
剩下的部分在
连接酶
作用下相同的粘性末端就会配对连接,同样载体也会继续连接成环,基因和
载体连
在一一起也有,而且首尾的顺序也有两种,连接体系跑电泳结果会有4个条带,至少是4种,而且就算那个连接后的片段大小符合你要求的那段纯化后也有一部分是不能表达的。哪四种就不用写了,你肯定知道的,不能...
...用两种限制
酶
同时处理粒,检外源DNA其优点可以
防止
质粒和含同的基因...
答:
每种限制性内切酶
的酶
切位点是不一样的,因此,不同的酶切位点不能连到一起,相同的才可以。用不同的切,到
连接的
时候,可以有效
防止载体自连
,只能让外源DNA片段和载体之间那相同的酶切位点相互连接。
找一种纤维素
酶
,找到他们的基因序列,设计好扩增引物,PCR实验;找到酶切...
答:
1.不同的粘性末端不能相连。所以,如果要相连,就要去除不同的粘性末端,进行平末端相连。粘末端变成平末端有两种方法:klenow酶的补平或者s1核酸酶的切平。为了减少载体自连,
可以用碱性磷酸酶处理载体
。最后将载体和目的基因链接,构建重组质粒。2.设计引物,自带酶切位点,扩增目的基因,直接改变目的...
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