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阳性克隆的检测方法
求助
通用引物验证阳性克隆
答:
通用引物验证阳性克隆的方法通常涉及PCR技术
。PCR(聚合酶链式反应)是一种分子生物学技术,通过DNA复制在体外扩增特定的DNA片段。在验证阳性克隆时,通用引物被设计用来与克隆载体上的通用序列结合,从而扩增出插入片段。这种方法可以快速、准确地鉴定出含有目的基因的阳性克隆。通用引物的设计原则是基于载体上...
质粒转化后得到的
阳性克隆
有哪些
方法
可以鉴定?并说明鉴定的依据。
答:
1
菌落PCR
。设计引物扩增质粒特有的目的片段,如果阳性克隆里面有改片段,则说明转化成功。2
快抽质粒
。将阳性菌落划平板,几个小时后,富集菌,然后快速抽提。看质粒大小有没有插入目的片段。
3 提质粒,酶切鉴定。4 提质粒测序
。1,2 都是早期的快速鉴定,假阳性高;3,4慢,但是比较确信。一般组合来...
阳性克隆
筛选
方法
及原理
答:
蓝白筛选法、标志筛选法
。1、蓝白筛选法:某些质粒带有大肠杆菌的半乳糖苷酶基因片段,在半乳糖苷酶基因的基因区外又另外引入了一段含多种单一限制酶位点的DNA序列。2、标志筛选法:某些质粒携带某种标志基因,当外源DNA插入到该标志基因中时,该标志基因将被破坏,使重组克隆具有某种标志性表型或特性,...
系统分析你掌握的几种重组
阳性克隆
子的筛选和鉴定
方法
答:
4)
PCR法
(3)根据目的基因表达产物采用免疫化学方法筛选。
做基因敲除如何快速筛出
阳性克隆
?
答:
通过病毒法,化学转染法或电转法将gRNA和Cas9转入细胞中
,根据转染方法不同进行不同时长的药筛,药筛完成后挑选单克隆培养。选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序验证,筛选出基因敲除的阳性克隆。
琼脂糖凝胶电泳如何判别是
阳性克隆
?
答:
1、琼脂糖凝胶电泳判别是阳性克隆琼脂糖凝胶电泳判别是阳性克隆根据重组子遗传重组表型改变的筛选法:利用抗生素抗性基因进行筛选,
利用报告基因筛选克隆子
,据重组子结构特征的筛选法,琼脂糖凝胶电泳比较重组DNA的大小。2、限制性内切酶分析。印迹杂交方法。PCR法。
基因克隆有哪些步骤,如何筛选
阳性克隆
答:
筛选
阳性克隆
一般常采用蓝白
克隆方法
,就是在载体上,序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列,如果不被破坏,产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物,形成蓝色产物。如果有目的序列插入,这个酶就不能表达,形成的克隆就是白色的。挑取阳性克隆,测序确认无变异和方向后,扩增质粒,提纯质粒。
如何进行重组DNA
阳性克隆的
鉴定
答:
首先,要了解重组DNA的大小;然后选择引物进行PCR;最后跑电泳,看在相应位置是否存在DNA带。
克隆文库中,怎样
检测阳性克隆
子?
答:
最常用的
方法
是在PCR之后 用Northern杂交
的方式检测
这个效果很好的 当然了 如果实验室里面有专用的芯片就更好了
如何进行重组DNA
阳性克隆的
鉴定
答:
还有一种假
阳性
,就是目的基因和质粒在连接时,方向接反了。如何防止假阳性,
方法
有三种。第一,用同尾酶去切,可防止质粒自身环化;第二、用双标记基因法,如抗氨苄青霉素基因和抗四环素基因两个标记基因,这个方法一句话给你说不清楚,先简单了解一点;第三、用基因探针去
检测
,这个方法是最可靠的。
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