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阳性克隆筛选方法及原理
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推荐答案 2023-12-24
蓝白筛选法、标志筛选法。
1、蓝白筛选法:某些质粒带有大肠杆菌的半乳糖苷酶基因片段,在半乳糖苷酶基因的基因区外又另外引入了一段含多种单一限制酶位点的DNA序列。
2、标志筛选法:某些质粒携带某种标志基因,当外源DNA插入到该标志基因中时,该标志基因将被破坏,使重组克隆具有某种标志性表型或特性,而非重组克隆则无此标志性表型或特性,通过观察表型或特性即可筛选出重组克隆。
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筛选阳性克隆的原理
.
答:
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等
。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数...
系统分析你掌握的几种重组
阳性克隆
子的
筛选和
鉴定
方法
答:
1)利用抗生素抗性基因进行筛选 2)通过α互补使菌产生颜色来筛选 3)利用报告基因筛选克隆子
(2)根据重组子结构特征的筛选法 1)琼脂糖凝胶电泳比较重组DNA的大小 2)限制性内切酶分析 3)印迹杂交方法 4)PCR法 (3)根据目的基因表达产物采用免疫化学方法筛选。
G418
筛选阳性克隆的
优化
方法
有哪些?
答:
另一种方法是使用套环,将套环固定在阳性克隆周围,然后在套环内加入胰蛋白酶或EDTA进行消化
。消化完成后的物质会被吸收到新的培养孔中进行培养。最后,通过有限稀释法,将这些阳性克隆分散到96孔板中进行精确筛选,确保每个孔只含有单一的阳性克隆。通过这样的步骤,筛选过程更为精确和有效,提高了阳性克隆...
基因克隆有哪些步骤,如何
筛选阳性克隆
答:
筛选阳性克隆一般常采用蓝白克隆方法
,就是在载体上,序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列,如果不被破坏,产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物,形成蓝色产物。如果有目的序列插入,这个酶就不能表达,形成的克隆就是白色的。挑取阳性克隆,测序确认无变异和方向后,扩增质粒,提纯质粒。
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