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阳性克隆PCR验证方法
仅分子生物学
阳性
病人分类怎么写?
答:
(1)核酸杂交(2)
PCR
筛选(文库,菌落)(3)免疫筛选【解释】 15、基因组文库与cDNA文库有哪些差异? (1)cDNA文库 包含着细胞全部mRNA信息,基因组文库 包含有生物全部的基因。 (2)cDNA文库具有组织细胞特异性,基因组文库无。 (3)cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选
克隆
得到细胞特异表达的基因。
用于基因分型的荧光探针
PCR
原理是什么
答:
如在
PCR
引物端事先构建一个内切酶位点,扩增的靶DNA可直接
克隆
到M13,PUC19等相应酶切位点的载体中。 (五)可扩增RNA或cDNA:先按通常
方法
用寡脱氧胸苷引物和逆转录酶将mRNA转变成单链cDNA,再将得到的单链cDNA进行PCR扩增,即使mRNA转录片段只有100ngcDNA中的0.01%,也能经PCR扩增1ng有242碱基对长度的特异片段,有些...
哪些
方法
可以检测转基因植物中的外源基因2
答:
4、首次以CaMV35S、FMV启动子、NOS终止子、标记基因NPTII、抗除草剂基因EPSPS、PAT、抗虫基因CryIAb为检测目标,设计、筛选出特异性引物,优化实验参数,建立了转基因植物
PCR
定性检测
方法
体系,灵敏度达0。1﹪。5、
克隆
了CaMV35S、FMV启动子、NOS终止子、标记基因NPTII、抗除草剂基因EPSPS、PAT、抗虫基因...
顺反子的多顺反子的应用前景
答:
用
PCR
、激光扫描和Westernblot等
方法
检测都证实man、gfp、aadA三个基因且均得到表达,用RFLP证实表达盒整合到烟草质体基因组中。2、利用脑心肌炎病毒(EMCV)及脊髓灰质炎(Polio)病毒内核糖体进入位点(IRES),连接mIL-12p40及p35cDNAs和筛选基因新霉素磷酸转移酶(NeoR),
克隆
至逆转录病毒载体pGCEN中,...
PCR
扩增的常见问题
答:
可互相拼接,与引物互补后,可扩增出PCR产物,而导致假
阳性
的产生,可用巢式
PCR方法
来减轻或消除。出现非特异性扩增带PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度...
pcr
的关键性技术
答:
引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行
PCR
扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假
阳性
。需重新设计引物。 靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性。这种假阳性可用以下
方法
解决:操作时应小心轻柔,...
关于hpv问题,在线求解答
答:
至今,HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测,主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的
PCR方法
具有特异、敏感、简便、快速等优点,为HPV检测开辟了新途径。1)组织病理检查:可见角化细胞和凹空细胞。准确率80--90%。2)抗HPV衣壳抗原的免疫组织化学检查:用HPV免疫动物后产生的多
克隆
抗体查组织HPV...
规范化的
pcr
实验室应注意哪些
答:
2、样品准备和RNA-
PCR
RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的
方法
也有报道。3、建立前PCR区。该去专门用于准备各种反应,这个区域必须保持干净,而且没有来自
克隆
和样品准备的污染。前PCR...
怎么防止
PCR
实验室污染
答:
还有一种容易忽视,最可能造成
PCR
产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。实验室中
克隆
质粒的污染:在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做
阳性
对照的检验室,这个问题也比较常见,...
pcr
检查是什么
答:
聚合酶链式反应,简称
PCR
。其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种
方法
,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、
克隆
和核酸序列分析等基础研究,还可...
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