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t4连接酶摩尔比怎么计算
t4连接酶
连接体系
怎么计算
答:
最适克隆载体/插入片段
摩尔比
。经查询
t4连接酶
连接体系的相关资料得知,t4连接酶连接体系
计算
公式为最适克隆载体/插入片段摩尔比。T4-DNA连接酶即T4DNA连接酶,可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合。
请教,关于KPn1高温灭活纯化和
T4连接酶
体系的生化问题
答:
自己回答:现在
连接
的体系应该是没什么问题,可能是双
酶
切的时候没有完全把位点切开,毕竟两种酶在共用buffer的情况下存在竞争,虽然之前做过交叉试验验证了可行性。目前的计划是分别单酶切后纯化,保证能切开。 我们采用的
摩尔比
是片段:载体=3:1,理论是可行的,
T4
ligase的效率是可信的。总之,还要...
高中生物
答:
(1)磷酸二酯键 (2)病毒、噬菌体 (3)核糖体(具体是RNA聚合酶)(4)BamHI CaCl2 方案:1.BamHI分别切目的基因和质粒,50ul体系,37℃,2.5h。跑电泳,条带单一,目的基因直接过柱纯化,质粒切胶回收。2.
T4连接酶
链接质粒和目的基因,
摩尔比
目的:质粒=3:1,16℃,过夜。3. 重组质...
急!平末端
连接
问题
答:
你用的是T4连接酶吧?平末端连接,一定要用大量的目的片段去竞争载体自连,
一般要保证你的片段和你的载体的摩尔数目之比要达到8:1以上才能达到比较高的连接效率
。10微升体系中,一般T4连接酶都是用0.5微升的。然后你按照10:1摩尔比加入你的片段和载体就行了,用水补足体积。此外,还有一点,平末端...
双
酶
切时,是直接用pcr产物就可以,还是需要
答:
2、
酶
切、回收后的PCR产物与载体的
连接
摩尔比
的
计算
,很多人凭经验也可以。但对于初学者从头认真计算则 非常有必要。回收的载体片段:回收的PCR产物片段=1:3到1:10 ,一般取前者0.03pmol,后者取0.3pmol。pmol为单位的DNA转换为为μg单位的DNA:(X pmoles×长度bp×650)/ 1,000,000 (...
平末端
如何连接
答:
1、平末端法,有些核酸内切酶切出的DNA分子是平末端,对DNA分子的单链末端亦可用核酸酶S1或DNA聚合酶Ⅰ来修平或补齐,然后用
T4
DNA
连接酶
将不同片段连接起来。该法形成重组DNA分子的效率低,只及粘性末端法的1%。2、人工接头法,1976年发展起来的。首先用化学法合成具有某种限制性内切酶识别位点的序列...
T4连接
后对其质粒PCR条带不亮,为什么?
酶
切没有条带,是否连接上?
答:
很显然你的质粒没有构建成功。感觉是
连接
出了问题,pBI121载体很大,回收比较困难,建议你测一下回收后的浓度。如果太低的话,建议加大
酶
切量。121载体至少应该达到50-100ng,然后再按1:3-10
摩尔比
加入小片段.至于PCR验证出现假阳性,太正常了。还是酶切比较靠谱。
简述DNA重组与分子克隆化基本原理与过程
答:
T4
噬菌体NDA
连接酶
0.1Weiss单位 5mmol/L ATP 1μl 于16℃温育1-4小时 10xT4噬菌体DNA连接酶缓冲液 200mmol/L同Tris.Cl(pH7.6) 50mmol/K MgCl2 50mmol/L二硫苏糖醇 500μg/ml牛血清白蛋白(组分V.Sigma产品)(可用可不用) 该缓训液应分装成小份,贮存于-20℃。 另外,再设立两个对照反应,其中含有(...
摩尔比怎么
换算成体积比
答:
V=m/d, 就能求出固体或液体体积比了。最适克隆载体/插入片段
摩尔比
。经查询
t4连接酶
连接体系的相关资料得知,t4连接酶连接体系
计算
公式为最适克隆载体/插入片段摩尔比。T4-DNA连接酶即T4DNA连接酶,可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合。
酶
连体系
怎么算
答:
酶连体系
计算
公式为最适克隆载体/插入片段
摩尔比
。根据查询相关资料信息显示,
T4
-DNA
连接酶
即T4DNA连接酶,可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5-P末端和3-OH末端之间以磷酸二酯键结合。
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