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环状聚合酶延伸反应
PCR的变性、退火、
延伸
分别指?
答:
变性:加热使模板DNA在高温下(94℃左右)双链间的氢键断裂而形成两条单链。退火;使溶液温度降至50~60℃,模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合。
延伸
:溶液
反应
温度升至72℃,耐热DNA
聚合酶
以单链DNA为模板,在引物的引导下,利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸(dNTP),按5'一3’方向复制出...
pcr
反应延伸
的温度
答:
70~75℃之间。从pcr
反应
条件看出,
延伸
的温度70~75℃之间,常用温度为72℃,过高的延伸温度不利于引物和模板的结合,
聚合酶
链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。
聚合酶
链式
反应
循环参数
答:
在PCR循环中,一般进行25到40个循环,过多的循环可能导致非特异性扩增。最后的
延伸
阶段,通常在最后一个循环结束后,在72℃保持5到15分钟,以确保引物完全延伸并使单链产物形成双链。在此过程中,要特别注意PCR过程中的污染问题,主要源自样本间的交叉污染和前一次
反应
残留(carry-over)的可能影响。
PCR的
反应
包括三个主要步骤
答:
1、模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮
反应
作准备;2、模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;3、
延伸
:DNA
聚合酶
...
环状
DNA的复制
答:
双链体环转化成一种共价闭合形式,随后形成超螺旋。由噬菌体基因组编码的A蛋白,在双链DNA正链的特定位点上产生缺口,这一位点就被定义为复制起始点。切开复制起始点之后,A蛋白与切口产生的5'端保持连接的状态,而其3'端则在DNA
聚合酶
作用下
延伸
。DNA的结构在该
反应
中具有重要作用,因为DNA只有在负...
聚合酶
链
反应
的原理
答:
以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向
延伸
,合成DNA新链(因其
反应
过程有高温,所以反应所用的
聚合酶
必须为热稳定DNA聚合酶)。这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能...
聚合酶
链式
反应
概念?
答:
聚合酶
链式
反应
(PCR)是一种分子生物学技术,用于在体外复制特定的DNA片段,其原理基于DNA双链复制。聚合酶链式反应(PCR)是一种常用的分子生物学技术,用于快速、特异地扩增DNA片段。该技术由变性-退火-
延伸
三个基本反应步骤构成,通过将DNA片段在热条件下变性解链,然后冷却至较低温度重新形成双链。最...
聚合酶
链式
反应
名词解释
答:
聚合酶
链式
反应
名词解释如下:1、技术原理:PCR技术利用DNA的半保留复制机制,通过在DNA模板上添加引物,然后在DNA聚合酶的作用下,以引物为起始点,沿模板链
延伸
直至完成一条DNA的合成。这个过程会在低温变性、引物退火、酶促合成等步骤中反复进行,从而在短时间内将目标DNA片段扩增数百万倍。2、实验流程...
聚合酶
链式
反应
是怎么回事
答:
(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的
延伸
:DNA模板--引物结合物在TaqDNA
聚合酶
的作用下,以dNTP为
反应
原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的...
聚合酶
链
反应
的应用模式
答:
RNA扩增包括两个步骤:①在单引物的介导下和逆转录酶的催化下,合成RNA的互补链cDNA;②加热后cDNA与RNA链解离,然后与另一引物退火,并由DNA
聚合酶
催化引物
延伸
生成双链靶DNA,最后扩增靶DNA。在RT-PCR中关键步骤是RNA的逆转录,cDNA的PCR与一般PCR条件一样。由于引物的高度选择性,细胞总RNA无需进行分级分离,即可直接...
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