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环状聚合酶延伸反应
聚合酶
链
反应
是什么?
答:
聚合酶
链
反应
(PCR)的基本原理是一种酶促合成反应。即在模板DNA、引物和脱氧核糖核苷酸存在下,在DNA聚合酶的作用下,使DNA链扩增
延伸
。试验先通过加热变性,使DNA双螺旋的氢链断裂,解离成单链DNA;然后通过退火,突然降温使引物与其互补的模板在局部形成杂交链;然后再在DNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸...
聚合酶
链
反应
简介
答:
由Khorana及其同事于1971年提出:“经过DNA变 性,与合适引物杂交,用DNA
聚合酶延伸
引物,并不断重视该过程便可克隆tRNA基 因”。但由于当时很难进行测序和合成寡核苷酸引物,且当时(1970年)Smith等发现了 DNA限制性内切酶,使体外克隆基因成为可能,所以,使Khorana等的早期设想被人们遗忘。 4.2 聚合酶链
反应
的发明 直到...
定点突变是怎么通过PCR作用达到目的的
答:
定点突变是准备多个带突变的引物,退火后全部突变引物都结合在同一
环状
单链模版,PfuTurbo
聚合酶延伸
,碰到下一个引物就停止,各片断经连接成环,和单链模版组成杂和环,DpnI消化双链模版,也消化杂和环中的模版,只留下新合成的带多个突变的单链环,得以转化E.coli,形成双链质粒。具体来讲是:设计一...
聚合酶
链式
反应
(PCR)原理是什么?
答:
PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA
聚合酶
最适
反应
温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,
延伸
...
pcr的三个步骤
答:
PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA
聚合酶
最适
反应
温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,
延伸
...
PCR实验设置
延伸反应
的原因
答:
taq
聚合酶
是高温活性酶,在72度的时候合成DNA。如果是循环结束后的5~10分钟终
延伸
,它的作用实际上是起到一个补偿作用,有时候你循环过程中的延伸时间没有控制好,聚合酶并没有延伸完毕就开始下一个循环了,这样一个终延伸可以使未合成完的DNA补完。另外还有就是使末端加A充分。
聚合酶
链
反应
的反应体系
答:
在一个典型的PCR
反应
体系中需加入:适宜的缓冲液、微量的模板DNA、4×dNTPs、耐热性
多聚酶
、Mg2 和两个合成的DNA引物。模板DNa 94℃变性1min,引物与模板40~60℃退火1min,72℃
延伸
2min。在首次循环前模板预变性3~5min;在末次循环后,样品仍需继续延伸3~5min以上,确保扩增的DNA为双链DNA。为便于了解PCR反应...
做PCR反应为什么在循环结束后要有5min
延伸反应
?
答:
--- 看来可能我的表述不够清楚,那我稍微详细的说下 我们来看看最后一个循环 先95度,dna在高温下变性,解链成单链分子 然后退火,具体温度与所用引物有关,就以55度为例吧。引物与单链dna模板结合上去 再72度
延伸
,在taq
聚合酶
的作用下,引物延伸。该循环结束。注意,此时尚有正处于合成过程中...
聚合酶
链式
反应
是什么呢?
答:
基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。中文名聚合酶链式
反应
外文名Polymerase Chain Reaction简称PCR属性链式反应PCR的创建Khorana (1971)等最早提出核酸体外扩增的设想:“经DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA
聚合酶延伸
引物,并不断重复该过程便...
聚合酶
链(PCR)
反应
原理
答:
活性最佳)的作用下,以dntp为原料,从引物的5′端→3′端
延伸
,合成与模板互补的dna链。还有就是体外快速dna复制 还有就是pcr
反应
五要素:参加pcr反应的物质主要有五种即引物(pcr引物为dna片段,细胞内dna复制的引物为一段rna链)、
酶
、dntp、模板和缓冲液(其中需要mg2+)。个人觉得这些才是重点 ...
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