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阳性克隆PCR验证方法
通过质粒的提取及检测如何判断某个菌落是否是假
阳性克隆
?
答:
1、菌落
PCR
。设计引物扩增质粒特有的目的片段,如果
阳性克隆
里面有改片段,则说明转化成功。2、快抽质粒。将阳性菌落划平板,几个小时后,富集菌,然后快速抽提。看质粒大小有没有插入目的片段。3、提质粒,酶切鉴定。4、提质粒测序。
基因克隆有哪些步骤,如何筛选
阳性克隆
答:
简单的说一下:扩增目的基因,比如通过
PCR
的方法。PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPO TA的方法插入到载体质粒。转染大肠杆菌 筛选
阳性克隆
一般常采用蓝白
克隆方法
,就是在载体上,序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列,如果不被破坏,产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物,形成蓝色产物。
求分子
克隆
具体实验步骤一份~~多谢各位大侠啦~
答:
包括细菌基因组DNA提取、16SrDNA特异引物
PCR
扩增、扩增产物纯化、DNA测序、序列比对等步骤。是一种快速获得细菌种属信息的
方法
。利用16S rDNA鉴定细菌的技术路线:细菌培养液基因组DNADNA提取PCR扩增16S rDNA片段片段回收连接克隆载体
阳性克隆
鉴定测序序列比对三、操作步骤(一)细菌基因组DNA提取1. 挑单菌落接种到10 mL LB...
基因
克隆
的基本步骤有哪些
答:
(2)
PCR
筛选和限制酶酶切法:提取转化子中的重组DNA分子作模板,根据目的基因已知的两端序列设计特异引物,通过PCR技术筛选
阳性克隆
。PCR法筛选出的阳性克隆,用限制性内切酶酶切法进一步鉴定插入片段的大小。(3)核酸分子杂交法:制备目的基因特异的核酸探针,通过核酸分子杂交法从众多的转化子中筛选目的...
基因
克隆
的
方法
有哪些
答:
简单的说一下:扩增目的基因,比如通过
PCR
的方法。PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPO TA的方法插入到载体质粒。转染大肠杆菌 筛选
阳性克隆
一般常采用蓝白
克隆方法
,就是在载体上,序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列,如果不被破坏,产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物,形成蓝色产物。
什么是基因
克隆
。。还有简述一下基因克隆的应用前景
答:
"分"是指分离制备合格的待操作的DNA,包括作为运载体的DNA和欲
克隆
的目的DNA;"切"是指用序列特异的限制性内切酶切开载体DNA,或者切出目的基因;"连"是指用DNA连接酶将目的DNA同载体DNA连接起来,形成重组的DNA分子;"转"是指通过特殊的
方法
将重组的DNA分子送入宿主细胞中进行复制和扩增;"选"则是从宿主群体中挑选...
怎样
克隆
一个目的基因?
答:
目的基因的
克隆
是利用一个单一的基因副本的行为。有
pcr方法
,凝胶电泳方法,色谱法,琼脂糖凝胶电泳法,质粒法等。具体方法可分别检索文献。常用的植物目的基因克隆技术 1、通过已知基因产物的分析和鉴定 这类技术主要通过生物化学和病理学研究分离鉴定有关基因的蛋白产物,并对蛋白质氨基酸顺序进行分析,推断...
pcr
需要注意的问题
答:
引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行
PCR
扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假
阳性
。需重新设计引物。靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性。这种假阳性可用以下
方法
解决:...
我想
克隆
一个基因。步骤是:先进行
PCR
,PCR产物纯化回收,然后连接,转化...
答:
你也是老手了,300bp的片段连接也是小意思,基本的问题就不谈了:1,不成功是怎么不成功,假
阳性
?如果是这样,多挑点(20个)鉴定 2,试试培养基中加1%葡萄糖,以及将片段末端磷酸化试试,都能提高连接和转化效率。我觉得,片段与载体比例不是根本原因,300bp很好连,而且是T载体,就算比例比较夸张...
做单
克隆
测序是菌液好还是菌液
PCR
后测好
答:
如果实在没有IPTG和X-gal,也最好能先挑几个单菌落去做菌落
PCR
,从中选取阳性的菌落去做液体摇菌,提质粒,找一个目标判断上有的酶做一个单切,同时用自连的空载作为对照,看是否能够切开。如果菌体克隆切开了,空载切不开,才能说明找到了
阳性克隆
。送去测序才比较可靠。否则直接送去测序,很可能...
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