聚丙烯酰胺凝胶制备

我制备的分离胶不能聚合,为什么?浓缩胶聚合了,我的方案是;
试剂
(1)30%丙烯酰胺溶液 取丙烯酰胺60g与亚甲基双丙烯酰胺1.6g,加水至
200ml,滤纸滤过,避光保存。
(2)分离胶缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷36.3g、加水70ml,用盐酸调节pH值至8.8,加水至100ml。
(3)浓缩胶缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷6.0g、加水70ml,用盐酸调节pH值至6.8,加水至100ml。
(4)电泳缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷6.0g、甘氨酸28.8g、十二烷基硫酸钠1.0g,加水至1000ml。
3.操作法
(1)制胶 用30%丙烯酰胺溶液-分离胶缓冲液-20%十二烷基硫酸钠溶液-10%过硫酸铵溶液(新鲜配制)-四甲基乙二胺-水(5.0∶1.5∶0.08∶0.1∶0.01∶5.3)制成分离胶液,灌入模具内至一定高度(剩余体积留作制备浓缩胶用),用水封顶,聚合完毕,倾去水层。再用30%丙烯酰胺溶液-浓缩胶缓冲液-20%十二烷基硫酸钠溶液-10%过硫酸铵溶液-四甲基乙二胺-水(0.8∶1.3∶0.025∶0.05∶0.005∶2.4)制成浓缩胶液,灌在分离胶上,插入样品梳(如为圆盘电泳,用水封顶),待浓缩胶液聚合后,小心除去样品梳或水。

(1)30%丙烯酰胺溶液 取丙烯酰胺60g与亚甲基双丙烯酰胺1.6g,加水至 200ml,滤纸滤过,避光保存。 (2)分离胶缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷36.3g、加水70ml,用盐酸调节pH值至8.8,加水至100ml。 (3)浓缩胶缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷6.0g、加水70ml,用盐酸调节pH值至6.8,加水至100ml。 (4)电泳缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷6.0g、甘氨酸28.8g、十二烷基硫酸钠1.0g,加水至1000ml。 3.操作法 (1)制胶 用30%丙烯酰胺溶液-分离胶缓冲液-20%十二烷基硫酸钠溶液-10%过硫酸铵溶液(新鲜配制)-四甲基乙二胺-水(5.0∶1.5∶0.08∶0.1∶0.01∶5.3)制成分离胶液,灌入模具内至一定高度(剩余体积留作制备浓缩胶用),用水封顶,聚合完毕,倾去水层。再用30%丙烯酰胺溶液-浓缩胶缓冲液-20%十二烷基硫酸钠溶液-10%过硫酸铵溶液-四甲基乙二胺-水(0.8∶1.3∶0.025∶0.05∶0.005∶2.4)制成浓缩胶液,灌在分离胶上,插入样品梳(如为圆盘电泳,用水封顶),待浓缩胶液聚合后,小心除去样品梳或水。
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