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qRtPCR
几个标本之间做RT-
PCR
为什么要把RN的浓度调成一致
答:
在做
QRT
-
PCR
时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH。内参的选择:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下。它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度...
qRT
-
PCR
中标准曲线制作及浓度梯度问题
答:
是的,标准曲线法是绝对定量法 不是,既然用到了内参,就是相对定量了 反转录的时候按照试剂盒的要求转录特定质量的RNA(RNA的浓度可以通过分光光度计测定),反转完后按照推荐的比例稀释产物即可,一般确保你要的基因的Ct值在20~25比较理想 对于同一类生物样本,提取三份RNA(每份RNA都应包含若干不同...
用
qRT
-
PCR
测某转录因子的mRNA,该蛋白具有三种不同亚型,引物要如何设 ...
答:
这个我和很久以前的一个课题很接近啊。首先,你要很明确你用来做实验的细胞这三种亚型都有充分的表达,或者某种细胞系,某种亚型的表达高。然后,如果只是翻译位点不同的话,那就和
PCR
无关了,应该改用western,可以测到不同的蛋白(一大一小)。你这么会想到要用PCR来区分这个呢,基础知识实在太差了...
为什么做
PCR
前要除去DNA样本中的蛋白
答:
于是就有了RT-
PCR
。2,再说实时PCR 细胞瞬时转录的mRNA种类颇多,各种mRNA含量也有实时的改变,这反映了细胞核内转录因子根据环境要求在做出相应的变化,realtime-PCR,以及quantitative realtime-PCR (简称
qRT
-PCR)就应运而生。原理:利用PCR高度的特异性,通过特定的引物能在复杂样品中得到的特定序列的...
PCR
的原理
答:
关注 展开全部 实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。我们实验室用的是BIOG-SYBR染料法,用
qRTPCR
来比较不同处理组间目的基因的表达差异。 已赞过 已踩过< 你对这个回答的评价是? 评论 收起 ...
为什么做
PCR
前要除去DNA样本中的蛋白
答:
于是就有了RT-
PCR
。2, 再说实时PCR 细胞瞬时转录的mRNA种类颇多,各种mRNA含量也有实时的改变,这反映了细胞核内转录因子根据环境要求在做出相应的变化,realtime-PCR,以及quantitative realtime-PCR (简称
qRT
-PCR)就应运而生。原理:利用PCR高度的特异性,通过特定的引物能在复杂样品中得到的特定序列...
为什么做
PCR
前要除去DNA样本中的蛋白
答:
于是就有了RT-
PCR
。2,再说实时PCR 细胞瞬时转录的mRNA种类颇多,各种mRNA含量也有实时的改变,这反映了细胞核内转录因子根据环境要求在做出相应的变化,realtime-PCR,以及quantitative realtime-PCR (简称
qRT
-PCR)就应运而生。原理:利用PCR高度的特异性,通过特定的引物能在复杂样品中得到的特定序列的...
pcr
做出基因表达增加1000多倍对吗
答:
于是就有了RT-
PCR
。2, 再说实时PCR 细胞瞬时转录的mRNA种类颇多,各种mRNA含量也有实时的改变,这反映了细胞核内转录因子根据环境要求在做出相应的变化,realtime-PCR,以及quantitative realtime-PCR (简称
qRT
-PCR)就应运而生。原理:利用PCR高度的特异性,通过特定的引物能在复杂样品中得到的特定序列...
RT-
PCR
的原理是什么?有何用途?
答:
原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行
PCR
扩增,而获得目的基因或检测基因表达。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。RT- PCR(Reverse Transcription-Polymerase ...
半定量RT-
PCR
和定量RT-PCR的区别
答:
定量RT-
PCR
(quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,
qRT
-PCR)是在用一步法或两步法,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。半定量RT-PCR需要跑电泳,根据条带亮度的强弱来判断模板拷贝数的高低或者是...
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