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qRtPCR
实时荧光定量
PCR
扩增效率低怎么办
答:
需要注意的是,对于真正的实时荧光定量
PCR
,部分降解的RNA可能无法给出基因表达的精确结果。未使用“预混液”
qRT
-PCR是一种分析RNA的高灵敏工具。由于PCR反应会扩增目的基因,所以误差也会被同时扩增出来。因此,无论何时都应当确保变异处于最低水平。“预混液”是反应试剂的混合液,在设置建立多个反应时...
RTPCR
的目的是什么?如果只想检测目的mRNA的量,还需做RTPCR吗?
答:
RTPCR的目的是DNA扩增。 只想检测目的mRNA的量,做
QRTPCR
。
pcr
原始数据包括哪些
答:
pcr
原始数据包括原始图片,甚至还有荧光定量(
qRT
-
PCR
)的原始数据。还有的机构要求有溶解曲线,扩增曲线,没有经过任何修饰的免疫组化、免疫荧光图片。其实在行内不论杂志社还是审稿人都对论文原始数据的重视度高了很多。多数期刊都要求作者提供原始数据,如:Nature出版社的期刊是要求提供 WB 原始图片的(...
半定量RT-
PCR
和定量RT-PCR的区别是什么?
答:
reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-
PCR
)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。定量RT-PCR(quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,
qRT
-PCR)是在...
半定量RT-
PCR
和定量RT-PCR的区别是什么?
答:
再进行
PCR
扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。定量RT-PCR(quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,
qRT
-PCR)是在用一步法或两步法,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
反转录
PCR
和荧光定量PCR
答:
一个是RT-
pcr
,reverse transcription pcr的简写 一个是real-time,一般不会简化为“rt-pcr”,又称实时定量pcr,Q-pcr,应该就是你说得荧光定量 而你要测mRNA的量,就是先反转录成cDNA,再作定量pcr,就是前两者的合,常称为
qRT
-
PCR
有很多real-time的试剂盒,你可以网上看下说明书 ...
实时荧光定量
PCR
可以用来精确测定DNA浓度吗
答:
biorad实时荧光定量
pcr
多少钱 采用SYBR Green I 嵌合荧光法进行Real Time
PCR
的专用试剂,用本制品进行Real Time
qRT
-PCR 可在同一反应管内连续进行。反应过程中无需开启管盖新增试剂并可对扩增产物进行实时检测,避免了污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。非常适合于微量RNA 尤其是微量RNA病毒的...
RT-
PCR
从实验到写作,零基础教程
答:
RT-
PCR
的具体步骤包括:提取RNA、合成cDNA、设计基因引物,然后按照制造商指南进行PCR。通过2-△△Ct方法分析目标基因的相对表达,例如,使用SensiFAST SYBR No-ROX试剂盒,内参选择GAPDH或U6。在定量分析中,如执行
qRT
-PCR,步骤如下:95°C预变性10分钟,40个循环,每轮包括95°C 15秒和60°C 1...
定量
PCR
的优化
答:
PCR
优化主要有:1.引物的浓度2.建议使用SYBR Green I和EvaGreen 进行扩增和溶解曲线的测试操作流程:I.靶的选择和试验设计1.针对目的基因序列选择合适的扩增片断查看以下三个网站是否有合适的已经证实的
QRT
-PCR的扩增引物,探针以及反应条件.如果没有合适的或者已经证实的可以提供参考,以下的设计方案仅供...
定量
PCR
的质量评价
答:
QRT
-
PCR
抑制物的组成QRT-PCR抑制物严重减少了PCR的灵敏度以及热动力学反应,高度的抑制还导致假阴性的结果。抑制物的来源:生物样品的核酸抽提以及共沉淀中的混合物,盐离子,尿素,血红素,heparin以及IgG.是否有抑制物的评价体系:1.通过对目的样品进行梯度稀释进行PCR扩增效率的检测2.通过内部扩增对照来...
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