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防止载体自连
如何使线性化
载体
不
自连
答:
单酶切要想防止自连,
最好的办法是把载体酶切产物脱磷酸
。脱了磷酸的载体就无法自连,它只能和目的片段连接。 如果不想脱磷,可以在连接反应体系中加大目的片段的数量,提高阳性克隆的比例,但这不能完全避免自连。 不过最好的办法还是
做双酶切
。单酶切连接实在麻烦。
如何提高DNA平端连接的效率?
答:
1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好
。2、
在体系中加一点切载体的酶
,只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连,应该可以大大提高平端连接的效率。3、足够多的载体和插入片段是最重要的 。生物帮上面有这方面的专题介绍, http://www.bio1000.com/zt/experiment/222145.html...
...单酶切后 怎么把目的基因连到已经酶切过的
载体
上 如何
防止自连
...
答:
单酶切要想防止自连,
最好的办法是把载体酶切产物脱磷酸
。脱了磷酸的载体就无法自连,它只能和目的片段连接。如果不想脱磷,可以在连接反应体系中加大目的片段的数量,提高阳性克隆的比例,但这不能完全避免自连。不过最好的办法还是
做双酶切
。单酶切连接实在麻烦。
为什么碱性磷酸酶处理可以
防止
质粒
载体
DNA
自连
的作用
答:
你需要了解2个事实,1是,正常核酸片段两端的组成是,3‘-OH,5’-p基,正因为5‘磷酸的存在,才能和另一个片段的3-OH发生缩合脱水反应,谓之自连。而碱性磷酸能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。这样就不会发生缩合反应,
防止自连
的发生。
再次请教生物问题
答:
一般,
防止
酶切产物自连最常用的就是双酶切,因为产生的粘性末端不同,所以很难发生自连。但实际上最后筛选的时候经常也会出现空载体的情况,这个很大一部分原因是有部分载体没有切动,并不是
载体自连
的问题。这些没有切动的载体转化率是非常高的,这是转化过程中假阳性的最大来源。载体自连最容易...
为什么碱性磷酸酶处理可以
防止
质粒
载体
DNA
自连
的作用
答:
DNA连接需要自由的磷酸和羟基反映,去磷酸化后
载体
的末端都没有磷酸就不能连接了。而连接片段时,由片段上提供磷酸,所以还能连接
如何提高目的基因和
载体
的连接效率
答:
为了
防止
目的两端及
载体
的两端连接在一起,可以用两种限制酶切割目的基因两端,同时也用这两种限制酶切割载体,这样就能形成两种黏性末端,同时也能防止目的基因和载体的
自连
。磁共振(MRI)成像具有良好的软组织对比度、高分辨成像和多参数扫描能力,且可以通过特异性磁共振分子探针来检测细胞分子水平的变化...
如何避免载体自连
现象
答:
碱性磷酸酶处理切开的
载体
~可减少
自连
的产生~再一点双酶切要充分~可先做一个小切的预实验~
胶回收及目的基因与t
载体连接
反应中为什么要有对照?
答:
连接反应中一般要设置阴性对照和阳性对照。设置阴性对照是为了
防止载体自连
,设置阳性对照是为了防止整个连接反应的体系有问题。
...检外源DNA其优点可以
防止
质粒和含同的基因的外源DNA片段自身环化_百...
答:
每种限制性内切酶的酶切位点是不一样的,因此,不同的酶切位点不能连到一起,相同的才可以。用不同的切,到连接的时候,可以有效
防止载体自连
,只能让外源DNA片段和载体之间那相同的酶切位点相互连接。
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没有连接酶载体自连
如何避免载体自连