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阳性克隆PCR验证方法
求助
通用引物验证阳性克隆
答:
综上所述,
通用引物验证阳性克隆是一种基于PCR技术的有效方法
,通过设计针对载体通用序列的引物,可以快速、准确地鉴定出含有目的基因的阳性克隆。在实际应用中,需要注意各种影响因素,并进行相应的优化和调整。
关于菌落
pcr
答:
1 如果你用了插入片断特异的引物扩增,那么可能是你连接时加的目的片断过多,菌表面粘附了目的片段(我曾经在没有斑的地方蘸一下,也能P出目的带),因此很可能出现假阳性。这样
验证阳性克隆
时建议你 1〉用插入片断两端的测序引物(如M13F+R),做个
PCR
,看能否扩出目的大小的带,如果有,说明肯定有...
求助
通用引物验证阳性克隆
答:
做PCR都要考虑Tm值吧。M13引物一般是M13F, M13R;M13F(-47), M13R(-48)配对使用。如果做菌落
PCR验证阳性克隆
的话,如果只是把目的片段插入到多克隆位点处,这两对引物哪一对都可以的。如果是样品需要测序的话,由于接近引物的读出效果不好,如果克隆的位点接近CMS的两端,一般需要用M13F(-47), M13R...
质粒转化后得到的
阳性克隆
有哪些
方法
可以鉴定?并说明鉴定的依据。_百度...
答:
1
菌落PCR
。设计引物扩增质粒特有的目的片段,如果阳性克隆里面有改片段,则说明转化成功。2
快抽质粒
。将阳性菌落划平板,几个小时后,富集菌,然后快速抽提。看质粒大小有没有插入目的片段。
3 提质粒,酶切鉴定。4 提质粒测序
。1,2 都是早期的快速鉴定,假阳性高;3,4慢,但是比较确信。一般组合来...
如何进行重组DNA
阳性克隆
的鉴定
答:
首先,要了解重组DNA的大小;然后选择引物进行
PCR
;最后跑电泳,看在相应位置是否存在DNA带。
...
pcr方法
获得基因,运用puc18载体说明
克隆
和筛选过程
答:
软件设计引物合成引物。利用高保证酶进行
PCR
扩增,扩增产物经纯化或胶回收得到目的片段。将目的片段、载体、Buffer按使用说明混合均匀过夜。经转化(重组载体加入感受态细胞,冰浴30min,42度热激90s,加入LB培养1.5--2h,收集菌体涂平板)14-16h后挑取单克隆培养4-6h后即可通过PCR进行
阳性克隆
的检测。
细菌
pcr
鉴定的结果存在一定的假
阳性
,如何进一步确认其阳性?
答:
将
pcr
确定
阳性
挑选出几个
克隆
,培养后进行提质粒,酶切,电泳鉴定是否有目标片段插入,可以避免假阳性。另外,最保险的
办法
就是,酶切确认过的克隆,再送去测个序,保证目标片段的序列是完全正确的。当然,也可以直接取几个单克隆去测序,看哪一个是阳性。
细菌
pcr
鉴定的结果存在一定的假
阳性
,如何进一步确认其阳性
答:
将
PCR
确定
阳性
挑选出几个
克隆
,培养后进行提质粒,酶切,电泳鉴定是否有目标片段插入,可以避免假阳性。另外,最保险的
办法
就是,酶切确认过的克隆,再送去测个序,保证目标片段的序列是完全正确的。当然,也可以直接取几个单克隆去测序,看哪一个是阳性。
克隆文库中,怎样检测
阳性克隆
子?
答:
最常用的
方法
是在
PCR
之后 用Northern杂交的
方式
检测 这个效果很好的 当然了 如果实验室里面有专用的芯片就更好了
为什么篮斑做
PCR
菌液鉴定也能P出来条带呢
答:
1 如果你用了目的片断特异的引物,那么可能是你连接时加的目的片断过多,菌表面粘附了目的片段(我曾经在没有斑的地方蘸一下,也能P出目的带),这样
验证阳性克隆
时建议你 1〉用T-vector两端的测序引物(如M13F+R),做个
PCR
,看能否扩出目的大小的带,如果有,说明肯定有片断连入T载体;如果能用...
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